桑树核DNA含量测定及同源多倍体基因表达差异初探
发布时间：2021-04-12 06:31
桑树是一种种质资源丰富、倍性复杂多变的木本植物,具有重要经济价值和生态价值,桑属植物的C值等基础科学数据仍然有所缺乏,而多倍体育种作为提高桑树利用价值的重要途径,研究多倍化后桑树基因表达变化有重要意义。本试验中,首先对桑树倍性、核DNA含量的流式细胞术测定方法进行了优化,对部分桑树种质资源进行了染色体倍性和核DNA含量测定。同时利用转录组测序技术（RNA-seq）,基于测序样品细胞数和外源内标RNAs表达水平,初步以基因在每个细胞中的表达水平比较分析桑树同源多倍体与二倍体基因表达差异。本试验的主要内容和结论如下:1.桑树染色体倍性、核DNA含量测定的流式细胞术方法优化优化得到的最佳方法为:采集0.2 g幼叶置于预冷的平面玻璃上,加入MgSO4解离液,用双面刀片快速切碎,转移至培养皿中静置35 min,用300目细胞筛网过滤至1.5 mL离心管中,得到500μL单细胞核悬浮液,加入碘化丙啶（PI）溶液和RNase A溶液,4℃、避光染色30 min,用300目细胞筛网过滤后上机检测。初步建立的适合桑树测定的流式细胞术应用方法效果最佳,具有细胞碎...
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
使用不同解离液制备样品的峰值直方图
2.3.1.3离心漂洗次数选择将陕桑305的新鲜幼叶制备的细胞核悬浮液分别进行不离心（图2-3A）、离心漂洗1次（图2-3B）和离心漂洗2次（图2-3C）处理后，均可得到明确、清晰且集中的粒子团，直方图中主峰明晰，因此离心漂洗对桑叶单细胞核悬浮液的质量无明显影响。2.3.1.4新鲜幼叶与冷冻储存幼叶的比较图2-3不同离心漂洗次数制备样品的峰值直方图A：不离心漂洗；B：离心漂洗一次；C：离心漂洗两次Fig.2-3HistogramofpeakvaluesofsamplesusingdifferentcentrifugationtimesA:Uncentrifugation;B:Oncecentrifugation;C:TwicecentrifugationABC图2-2使用不同机械解离方法制备样品的峰值直方图A:平面玻璃上切碎法；B:玻璃培养皿上切碎法；C:玻璃研磨器研磨法；D：液氮研磨法Fig.2-2HistogramofpeakvaluesofsamplesusingdifferentmechanicaldissociationsA:Choppingonplainglass;B:Choppingonglassdish;C:Grindinginglasspestle;D:GrindinginmortarwithliquidnitrogenACBD15
2.3.1.3离心漂洗次数选择将陕桑305的新鲜幼叶制备的细胞核悬浮液分别进行不离心（图2-3A）、离心漂洗1次（图2-3B）和离心漂洗2次（图2-3C）处理后，均可得到明确、清晰且集中的粒子团，直方图中主峰明晰，因此离心漂洗对桑叶单细胞核悬浮液的质量无明显影响。2.3.1.4新鲜幼叶与冷冻储存幼叶的比较图2-3不同离心漂洗次数制备样品的峰值直方图A：不离心漂洗；B：离心漂洗一次；C：离心漂洗两次Fig.2-3HistogramofpeakvaluesofsamplesusingdifferentcentrifugationtimesA:Uncentrifugation;B:Oncecentrifugation;C:TwicecentrifugationABC图2-2使用不同机械解离方法制备样品的峰值直方图A:平面玻璃上切碎法；B:玻璃培养皿上切碎法；C:玻璃研磨器研磨法；D：液氮研磨法Fig.2-2HistogramofpeakvaluesofsamplesusingdifferentmechanicaldissociationsA:Choppingonplainglass;B:Choppingonglassdish;C:Grindinginglasspestle;D:GrindinginmortarwithliquidnitrogenACBD15
本文编号：3132810
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
使用不同解离液制备样品的峰值直方图
2.3.1.3离心漂洗次数选择将陕桑305的新鲜幼叶制备的细胞核悬浮液分别进行不离心（图2-3A）、离心漂洗1次（图2-3B）和离心漂洗2次（图2-3C）处理后，均可得到明确、清晰且集中的粒子团，直方图中主峰明晰，因此离心漂洗对桑叶单细胞核悬浮液的质量无明显影响。2.3.1.4新鲜幼叶与冷冻储存幼叶的比较图2-3不同离心漂洗次数制备样品的峰值直方图A：不离心漂洗；B：离心漂洗一次；C：离心漂洗两次Fig.2-3HistogramofpeakvaluesofsamplesusingdifferentcentrifugationtimesA:Uncentrifugation;B:Oncecentrifugation;C:TwicecentrifugationABC图2-2使用不同机械解离方法制备样品的峰值直方图A:平面玻璃上切碎法；B:玻璃培养皿上切碎法；C:玻璃研磨器研磨法；D：液氮研磨法Fig.2-2HistogramofpeakvaluesofsamplesusingdifferentmechanicaldissociationsA:Choppingonplainglass;B:Choppingonglassdish;C:Grindinginglasspestle;D:GrindinginmortarwithliquidnitrogenACBD15
2.3.1.3离心漂洗次数选择将陕桑305的新鲜幼叶制备的细胞核悬浮液分别进行不离心（图2-3A）、离心漂洗1次（图2-3B）和离心漂洗2次（图2-3C）处理后，均可得到明确、清晰且集中的粒子团，直方图中主峰明晰，因此离心漂洗对桑叶单细胞核悬浮液的质量无明显影响。2.3.1.4新鲜幼叶与冷冻储存幼叶的比较图2-3不同离心漂洗次数制备样品的峰值直方图A：不离心漂洗；B：离心漂洗一次；C：离心漂洗两次Fig.2-3HistogramofpeakvaluesofsamplesusingdifferentcentrifugationtimesA:Uncentrifugation;B:Oncecentrifugation;C:TwicecentrifugationABC图2-2使用不同机械解离方法制备样品的峰值直方图A:平面玻璃上切碎法；B:玻璃培养皿上切碎法；C:玻璃研磨器研磨法；D：液氮研磨法Fig.2-2HistogramofpeakvaluesofsamplesusingdifferentmechanicaldissociationsA:Choppingonplainglass;B:Choppingonglassdish;C:Grindinginglasspestle;D:GrindinginmortarwithliquidnitrogenACBD15
本文编号：3132810
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/dzwbhlw/3132810.html
