诱导子对桑悬浮细胞次生代谢物累积的研究

发布时间：2021-05-06 12:37

　　桑树产生的次生代谢物黄酮、酚类和生物碱等物质,具有多种生理药理活性,建立桑树细胞体外高效生产次生代谢产物的方法与技术,有益于实现对桑树药用活性成分的规模化开发利用。近年发展起来的植物组织培养生产次生代谢物的方法,具有不受环境限制,细胞增殖速度快的特点,已经用于植物次生代谢产物的工厂化生产。在植物细胞悬浮培养过程中可以通过添加外源诱导物来激活细胞代谢过程中酶的活性,从而能够增加次生代谢物的产量,甚至可以诱导出新的化合物。因此,本文在建立桑悬浮细胞培养体系的基础上,向桑悬浮细胞系中添加不同浓度的外源诱导子,以促进桑悬浮细胞次生代谢物的累积。主要研究结果如下:以桑品种育-711的叶片作为外植体诱导愈伤组织及初步建立悬浮细胞系。桑悬浮细胞在MS液体培养基中添加1.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L 2,4-D+0.1 mg/L NAA的培养条件下生长曲线呈“S”型,活细胞数量在悬浮培养第16 d时达到峰值。培养16 d后,由于培养基中的营养物质消耗以及有毒代谢物的积累导致活细胞数目减少,进入生长减缓期。因此,为保持细胞旺盛的分裂能力和细胞活性,桑悬浮细胞培养的继代时间为16 d左右较合适... 

【文章来源】：江苏科技大学江苏省

【文章页数】：89 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 绪论
    1.1 悬浮细胞培养
        1.1.1 悬浮细胞培养概述
        1.1.2 植物悬浮细胞培养的现状
        1.1.3 植物细胞培养生产次生代谢产物的分类与合成途径
        1.1.4 植物细胞培养生产次生代谢物的调控
    1.2 桑树
        1.2.1 桑的概述
        1.2.2 桑悬浮细胞及其次生代谢产物
        1.2.3 桑悬浮细胞研究现状
    1.3 诱导子
        1.3.1 诱导子概述
        1.3.2 诱导机理
    1.4 研究目的与主要内容
        1.4.1 研究目的与意义
        1.4.2 研究内容与技术路线
第2章 桑悬浮细胞培养体系的建立及其表征
    2.1 实验材料与仪器
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 实验试剂
        2.1.3 实验仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 桑悬浮细胞培养基的配制
        2.2.2 桑愈伤组织的诱导
        2.2.3 MS液体培养基中不同激素配比对桑悬浮细胞生长的测定
        2.2.4 桑悬浮细胞生长曲线的绘制
        2.2.5 桑悬浮细胞生长过程的细胞学观察
        2.2.6 SEM分析桑悬浮细胞生长过程的表面状态
        2.2.7 统计分析
    2.3 结果与分析
        2.3.1 MS液体培养基中不同激素配比对桑悬浮细胞生长的影响
        2.3.2 桑悬浮细胞生长曲线的绘制
        2.3.3 桑悬浮细胞生长过程的细胞学观察
        2.3.4 SEM分析桑悬浮细胞生长过程的表面状态
    2.4 本章小结
第3章 诱导子对桑悬浮细胞次生代谢物累积的影响
    3.1 实验材料与仪器
        3.1.1 实验材料
        3.1.2 实验试剂
        3.1.3 实验仪器
    3.2 实验方法
        3.2.1 不同诱导子的制备及对桑悬浮细胞的诱导
        3.2.2 桑悬浮细胞次生代谢产物积累的测定
        3.2.3 桑悬浮细胞超氧化物歧化酶活性的测定
        3.2.4 SEM分析不同浓度COR诱导的桑悬浮细胞表征
        3.2.5 统计分析
    3.3 结果与分析
        3.3.1 冠菌素、β-环糊精、壳聚糖对桑悬浮细胞生物量积累的影响
        3.3.2 冠菌素对桑悬浮细胞次生代谢产物积累的影响
        3.3.3 β-环糊精对桑悬浮细胞次生代谢产物积累的影响
        3.3.4 壳聚糖对桑悬浮细胞次生代谢产物积累的影响
        3.3.5 冠菌素、β-环糊精、壳聚糖对桑悬浮细胞超氧化物歧化酶活性影响
        3.3.6 SEM分析COR诱导的桑悬浮细胞表征
    3.4 讨论
    3.5 本章小结
第4章 复合诱导对桑悬浮细胞次生代谢累积的影响
    4.1 实验材料与仪器
        4.1.1 实验材料
        4.1.2 实验试剂
        4.1.3 实验仪器
    4.2 实验方法
        4.2.1 诱导子的制备及对桑悬浮细胞的诱导
        4.2.2 桑悬浮细胞生物量积累的测定
        4.2.3 桑悬浮细胞次生代谢产物积累的测定
        4.2.4 桑悬浮细胞超氧化物歧化酶活性的测定
        4.2.5 统计分析
    4.3 结果与分析
        4.3.1 复合诱导对桑悬浮细胞生物量积累的影响
        4.3.2 复合诱导对桑悬浮细胞次生代谢产物积累的影响
        4.3.3 复合诱导对桑悬浮细胞超氧化物歧化酶活性影响
    4.4 讨论
    4.5 本章小结
第5章 黄酮生物合成相关基因的鉴定与分析
    5.1 实验材料与仪器
        5.1.1 实验材料
        5.1.2 实验试剂
        5.1.3 实验仪器
    5.2 实验方法
        5.2.1 供试桑悬浮细胞的制备
        5.2.2 转录组测序实验流程
        5.2.3 测序原始数据以及质控数据统计
        5.2.4 cDNA文库测序
    5.3 结果与分析
        5.3.1 Denovo拼接
        5.3.2 基因表达差异性统计
        5.3.3 Unigene与nr数据库比对
        5.3.4 Unigene与SWISSPROT数据库比对
        5.3.5 Unigene与KOG分类
        5.3.6 Unigene与GO注释
        5.3.7 Unigene与KEGG注释
        5.3.8 黄酮代谢相关的差异表达基因鉴定
    5.4 讨论
    5.5 本章小结
结论
参考文献
攻读硕士期间发表的学术论文
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]含三唑氮杂环结构的黄酮类外源抗氧化剂的合成与分析[J]. 钟远平,唐潮声,余萍,段志芳.  化学世界. 2018(01)
[2]烟草悬浮细胞系的构建[J]. 孔琼,袁盛勇,肖亚楠,杨文超,陈俊梅,蒋双番,史艳春,杨升.  江苏农业科学. 2018(01)
[3]UPLC-MS/MS法测定药桑不同部位中1-脱氧野尻霉素的含量[J]. 孙莲,张晖,马晓丽.  化学研究与应用. 2017(03)
[4]桑树黄烷酮-3-羟化酶基因的克隆及在35份桑种质资源植株叶片中的表达差异[J]. 尚亚君,钱娇,倪红梅,方荣俊,潘刚,赵卫国,张林,刘利.  蚕业科学. 2016(05)
[5]红豆杉高产悬浮细胞系建立及其紫杉醇诱导的研究进展[J]. 王沐兰,杨生超,郁步竹,李唯奇.  广西植物. 2016(09)
[6]植物细胞悬浮培养中次生代谢产物积累的研究进展[J]. 陈月华,朱艳,张翔,秦民坚.  中国野生植物资源. 2016(03)
[7]桑树愈伤组织诱导及悬浮细胞系的建立[J]. 王超,姚晨辉,朱林琳,高敏,赵永亮,王海燕,王俊,吴福安.  蚕业科学. 2016(01)
[8]不同诱导子对黄芪悬浮培养细胞中黄芪多糖积累的影响[J]. 杨静,孙皓.  安徽农业科学. 2014(26)
[9]多胺介导真菌诱导子促进白桦三萜积累的初步研究[J]. 刘英甜,王晓东,周文洋,詹亚光,范桂枝.  中草药. 2014(05)
[10]曼地亚红豆杉细胞悬浮培养体系的建立[J]. 赵继鹏,杨淑慎.  西北农林科技大学学报(自然科学版). 2014(01)

博士论文
[1]红花黄酮类化合物生物合成途径关键酶基因的克隆与功能验证[D]. 刘飞.第二军医大学 2014
[2]棉花悬浮细胞系的建立及其培养细胞的程序性死亡的观察研究[D]. 夏启中.华中农业大学 2005

硕士论文
[1]壳聚糖羟基肉桂酸衍生物的制备及其抑菌活性的研究[D]. 杨采风.江苏科技大学 2016
[2]贯叶连翘悬浮细胞培养生产黄酮类物质的研究[D]. 王璟.华东理工大学 2015
[3]桑丁香假单胞菌稳产冠菌素关键技术的研究[D]. 李刚.江苏科技大学 2014
[4]桑细胞培养物的化学成分与植物悬浮细胞对芳香酚类化合物的生物转化研究[D]. 陶小宇.北京中医药大学 2013
[5]曼地亚红豆杉悬浮培养细胞产紫杉醇条件优化研究[D]. 赵继鹏.西北农林科技大学 2013
[6]桑树原生质体分离及融合的研究[D]. 羿德磊.山东农业大学 2012
[7]葡萄细胞培养及其次生代谢产物白藜芦醇的代谢调控[D]. 张真.甘肃农业大学 2008
[8]黑曲霉提取物与水杨酸对长春花悬浮细胞生长及生物碱代谢作用的研究[D]. 姜发军.湖南农业大学 2004



本文编号：3171933