对天牛具有毒杀作用的Bt蛋白的筛选和杀虫机理初探
发布时间：2021-05-06 15:20
苏云金芽胞杆菌（Bacillus thuringensis,Bt）是一种对多种害虫具有特异性毒杀作用的革兰氏阳性菌,研究Bt对天牛的杀虫活性有助于开辟天牛绿色防控新途径,是利用生物防治方法防治农林害虫的重要的手段。为深入发掘苏云金芽胞杆菌在防治林业害虫上的应用,利用Bt菌Cry8类基因编码的6种蛋白和营养期产生的两种分泌蛋白Vip1和Vip2,对光肩星天牛（Anoplophora glabripennis Motsch.）和双条杉天牛（Semanotus bifasiatus Matsch.）的幼虫通过室内生物活性测定实验,从中筛选出对这两种试虫有活性的Bt蛋白,并根据中肠切片的电镜观察和转录组数据比较分析,对杀虫机理进行了初步的探索。研究结果如下:1、通过对双条杉天牛人工饲料的筛选和室内人工饲料饲养,成功建立了人工饲养双条杉天牛的实验种群,本研究的结果也为天牛科其它天牛的人工饲料的开发提供借鉴。2、筛选出一种对光肩星天牛具有高活力的Bt蛋白—Cry8Ha1,生测结果显示,经胰凝乳蛋白酶消化的Cry8Ha1蛋白对光肩星天牛具有较高的活性,最高致死率可达95%;通过筛选,Cry8Ha1对...
【文章来源】：北京林业大学北京市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
主要缩略词和符号表
1 引言
1.1 国内外研究述评
1.1.1 两种蛀干天牛在林业上的危害
1.1.2 天牛的防治
1.1.3 天牛饲料的研究进展
1.1.4 苏云金芽胞杆菌的研究进展及趋势
1.1.5 转录组测序在昆虫领域研究现状
1.2 本论文研究的目的与意义
1.3 研究内容
技术路线
2 材料和方法
2.1 供试昆虫
2.2 实验材料
2.2.1 人工饲料的配制
2.2.2 菌株与基因
2.2.3 培养基和抗生素
2.2.4 SDS-PAGE相关溶液
2.2.5 试剂及配制方法
2.2.6 主要实验仪器
2.2.7 酶类与生化试剂
2.3 实验方法
2.3.1 双条杉天牛饲料筛选
2.3.2 Bt中Cry蛋白的提取
2.3.3 Bt中Vip蛋白的提取
2.3.4 SDS-PAGE分析
2.3.5 蛋白定量
2.3.6 天牛生物活性测定方法
2.3.7 光肩星天牛中肠电镜观察
2.3.8 光肩星天牛幼虫中肠RNA的提取
2.3.9 第1链cDNA的合成
2.3.10 转录组数据分析
3 结果分析
3.1 双条杉天牛人工饲料筛选结果分析
3.1.1 第1次正交实验结果分析
3.1.2 第2次正交试验结果与分析
3.1.3 优化饲料配方验证
3.2 Bt蛋白的定量分析
3.3 Cry8类蛋白胰凝乳蛋白酶消化条件建立
3.4 Bt蛋白对双条杉天牛生物活性测定结果
3.4.1 Bt蛋白对双条杉天牛幼虫死亡率影响
3.4.2 Bt蛋白对双条杉天牛幼虫体重的影响
3.5 对光肩星天牛具有活性的Bt蛋白筛选和杀虫机理研究
3.5.1 Bt蛋白对光肩星天牛生物活性测定结果
3.5.2 光肩星天牛中肠透射电镜观察
3.5.3 光肩星天牛中肠总RNA提取结果分析
3.5.4 光肩星天牛中肠转录组测序结果分析
3.5.5 差异表达分析
4 结论
5 讨论
参考文献
个人简介
导师简介
第二导师简介
获得成果目录
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]光肩星天牛的发生及防治[J]. 马跃. 农业与技术. 2017(07)
[2]双条杉天牛发生规律调查及防治药剂筛选试验[J]. 孟庆兰,王晓翠,刘阳,侯双霞,苗兴军. 现代农业科技. 2016(22)
[3]鳞翅目昆虫人工饲养技术研究进展[J]. 戴长庚,欧阳芳,陈湘燕,胡阳. 南方农业学报. 2016(05)
[4]2015年全球生物技术/转基因作物商业化发展态势[J]. Clive James. 中国生物工程杂志. 2016(04)
[5]辽宁地区林业有害生物双条杉天牛风险分析[J]. 王凤英,于秀杰,苏建明. 安徽农业科学. 2016(06)
[6]光肩星天牛防控技术研究进展[J]. 遇文婧,赵红盈. 中国农学通报. 2016(10)
[7]中国设施蔬菜害虫天敌昆虫应用研究进展[J]. 张帆,李姝,肖达,赵静,王然,郭晓军,王甦. 中国农业科学. 2015(17)
[8]稻纵卷叶螟人工饲料中防霉剂对曲霉的抑制效果[J]. 张树坤,王业成,苏建亚,任秀贝. 南京农业大学学报. 2014(02)
[9]基于新一代测序技术的昆虫转录组学研究进展[J]. 张棋麟,袁明龙. 昆虫学报. 2013(12)
[10]我国林业检疫性和危险性有害生物新名单的特点[J]. 李娟,崔永三,宋玉双,程相称. 中国森林病虫. 2013(05)
博士论文
[1]对金龟甲科、叶甲科害虫高毒力苏云金芽胞杆菌杀虫基因及工程菌的研究[D]. 闫贵欣.中国农业科学院 2009
[2]防护林杨树天牛灾害的生态调控理论与技术研究[D]. 骆有庆.北京林业大学 2005
硕士论文
[1]中华稻蝗若虫和成虫转录组的比较研究及线粒体转录组作图[D]. 吕红娟.陕西师范大学 2012
[2]双条杉天牛无公害防治技术研究[D]. 王宏琦.山东农业大学 2008
[3]北京园林双条杉天牛综合防治技术的研究[D]. 刘育俭.中国农业大学 2005
本文编号：3172156
【文章来源】：北京林业大学北京市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
主要缩略词和符号表
1 引言
1.1 国内外研究述评
1.1.1 两种蛀干天牛在林业上的危害
1.1.2 天牛的防治
1.1.3 天牛饲料的研究进展
1.1.4 苏云金芽胞杆菌的研究进展及趋势
1.1.5 转录组测序在昆虫领域研究现状
1.2 本论文研究的目的与意义
1.3 研究内容
技术路线
2 材料和方法
2.1 供试昆虫
2.2 实验材料
2.2.1 人工饲料的配制
2.2.2 菌株与基因
2.2.3 培养基和抗生素
2.2.4 SDS-PAGE相关溶液
2.2.5 试剂及配制方法
2.2.6 主要实验仪器
2.2.7 酶类与生化试剂
2.3 实验方法
2.3.1 双条杉天牛饲料筛选
2.3.2 Bt中Cry蛋白的提取
2.3.3 Bt中Vip蛋白的提取
2.3.4 SDS-PAGE分析
2.3.5 蛋白定量
2.3.6 天牛生物活性测定方法
2.3.7 光肩星天牛中肠电镜观察
2.3.8 光肩星天牛幼虫中肠RNA的提取
2.3.9 第1链cDNA的合成
2.3.10 转录组数据分析
3 结果分析
3.1 双条杉天牛人工饲料筛选结果分析
3.1.1 第1次正交实验结果分析
3.1.2 第2次正交试验结果与分析
3.1.3 优化饲料配方验证
3.2 Bt蛋白的定量分析
3.3 Cry8类蛋白胰凝乳蛋白酶消化条件建立
3.4 Bt蛋白对双条杉天牛生物活性测定结果
3.4.1 Bt蛋白对双条杉天牛幼虫死亡率影响
3.4.2 Bt蛋白对双条杉天牛幼虫体重的影响
3.5 对光肩星天牛具有活性的Bt蛋白筛选和杀虫机理研究
3.5.1 Bt蛋白对光肩星天牛生物活性测定结果
3.5.2 光肩星天牛中肠透射电镜观察
3.5.3 光肩星天牛中肠总RNA提取结果分析
3.5.4 光肩星天牛中肠转录组测序结果分析
3.5.5 差异表达分析
4 结论
5 讨论
参考文献
个人简介
导师简介
第二导师简介
获得成果目录
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]光肩星天牛的发生及防治[J]. 马跃. 农业与技术. 2017(07)
[2]双条杉天牛发生规律调查及防治药剂筛选试验[J]. 孟庆兰,王晓翠,刘阳,侯双霞,苗兴军. 现代农业科技. 2016(22)
[3]鳞翅目昆虫人工饲养技术研究进展[J]. 戴长庚,欧阳芳,陈湘燕,胡阳. 南方农业学报. 2016(05)
[4]2015年全球生物技术/转基因作物商业化发展态势[J]. Clive James. 中国生物工程杂志. 2016(04)
[5]辽宁地区林业有害生物双条杉天牛风险分析[J]. 王凤英,于秀杰,苏建明. 安徽农业科学. 2016(06)
[6]光肩星天牛防控技术研究进展[J]. 遇文婧,赵红盈. 中国农学通报. 2016(10)
[7]中国设施蔬菜害虫天敌昆虫应用研究进展[J]. 张帆,李姝,肖达,赵静,王然,郭晓军,王甦. 中国农业科学. 2015(17)
[8]稻纵卷叶螟人工饲料中防霉剂对曲霉的抑制效果[J]. 张树坤,王业成,苏建亚,任秀贝. 南京农业大学学报. 2014(02)
[9]基于新一代测序技术的昆虫转录组学研究进展[J]. 张棋麟,袁明龙. 昆虫学报. 2013(12)
[10]我国林业检疫性和危险性有害生物新名单的特点[J]. 李娟,崔永三,宋玉双,程相称. 中国森林病虫. 2013(05)
博士论文
[1]对金龟甲科、叶甲科害虫高毒力苏云金芽胞杆菌杀虫基因及工程菌的研究[D]. 闫贵欣.中国农业科学院 2009
[2]防护林杨树天牛灾害的生态调控理论与技术研究[D]. 骆有庆.北京林业大学 2005
硕士论文
[1]中华稻蝗若虫和成虫转录组的比较研究及线粒体转录组作图[D]. 吕红娟.陕西师范大学 2012
[2]双条杉天牛无公害防治技术研究[D]. 王宏琦.山东农业大学 2008
[3]北京园林双条杉天牛综合防治技术的研究[D]. 刘育俭.中国农业大学 2005
本文编号：3172156
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