高效、快速提取高质量稻曲病菌基因组DNA方法

发布时间：2021-05-11 03:30

　　稻曲病菌[Ustilaginoidea virens （Cooke） Takahashi]培养期间菌丝生长缓慢,且产生大量次生代谢产物,严重影响提取稻曲病菌基因组DNA质量与效率。将一步式提取法（Rapid one-step extraction,ROSE）增加异丙醇、NaAc冷冻沉淀DNA和70%无水乙醇漂洗DNA两个步骤,建立一种高效、快速提取高质量稻曲病菌基因组DNA的方法,即改良ROSE法,并将该方法与稻曲病菌基因组DNA传统提取方法（CTAB法、SDS法、试剂盒法和改良脲素法）在提取步骤、DNA纯度与得率、PCR反应和酶切效率等方面加以比较。结果表明,5种方法均得到稻曲病菌基因组DNA,但改良ROSE法同时具有无毒、环保、低成本、快速获取高质量DNA的优点。改良ROSE法s可用于稻曲病菌分子标记、遗传图谱构建等需短时间内快速获取DNA的分子试验研究,也适用于稻曲病菌基因精细定位、克隆和测序等需高质量DNA的分子试验。 

【文章来源】：东北农业大学学报. 2020,51(03)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 供试菌株
        1.1.2 供试药剂
        1.1.3 供试培养基
    1.2 方法
        1.2.1 菌丝收集
        1.2.2 稻曲病菌DNA提取方法
            1.2.2. 1 CTAB法
            1.2.2. 2 SDS法
            1.2.2. 3 试剂盒法
            1.2.2. 4 改良脲素法
            1.2.2. 5 改良ROSE法
        1.2.3 紫外光分光光度计检测
        1.2.4 DNA琼脂糖凝胶电泳检测
        1.2.5 PCR检测
        1.2.6 Eco RⅠ限制性内切酶酶切反应
2 结果与分析
    2.1 不同方法提取步骤、成本、毒性、耗时比较
    2.2 不同方法提取DNA质量比较
    2.3 DNA琼脂糖凝胶电泳检测
    2.4 PCR检测
    2.5 Eco RⅠ限制性内切酶酶切检测
3 讨论与结论


【参考文献】：
期刊论文
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[7]大豆种子DNA快速提取方法的改良及应用[J]. 朱振雷,束永俊,李勇,柏锡,才华,纪巍,朱延明.  东北农业大学学报. 2009(10)
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硕士论文
[1]四川省籼稻区水稻稻曲病菌遗传多样性分析及稻曲病防治技术研究[D]. 李竞生.四川农业大学 2009



本文编号：3180630