Dicer敲除对小菜蛾生长发育及RNAi效率的影响

发布时间：2021-05-24 19:58

　　Dicer是一种在进化上高度保守的核糖核酸内切酶,属于RNase III家族的成员,可以特异识别并切割双链RNA（double-stranded RNA,dsRNA）。在大部分昆虫中,Dicer分为两个同源基因Dicer-1（Dcr-1）和Dicer-2（Dcr-2）,二者分别作用在RNAi的miRNA途径和siRNA途径,同时Dcr-1可以参与生物体的生长发育调控。目前,小菜蛾上的Dicer还未有具体研究。因此,本实验利用CRISPR/Cas9技术分别敲除小菜蛾Dcr-1（PxDcr-1）和Dcr-2（PxDcr-2）基因,分析其对小菜蛾的影响,明确其功能。本实验通过PCR扩增拼接获得PxDcr-1和PxDcr-2两个基因,PxDcr-1的ORF为7524bp,编码2507个氨基酸,PxDcr-2的ORF为5085bp,编码1694个氨基酸,二者结构域基本相同,都含有解螺旋结构域、Dicer二聚体结构域、N端结构域、PAZ结构域以及两个RNaseⅢ结构域。但是PxDcr-2相比PxDcr-1缺少Dicer-PBD（partner-binding domain of the endo-... 

【文章来源】：福建农林大学福建省

【文章页数】：72 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 Dicer的研究进展
        1.1.1 Dicer的结构特点
        1.1.2 Dicer在 RNAi通路中的作用及原理
        1.1.3 Dicer的生理功能
    1.2 基于CRISPR/Cas9系统的基因敲除
    1.3 本研究的立题依据和意义
2 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 供试昆虫
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 主要仪器
    2.2 基因敲除品系的构建
        2.2.1 cDNA模板的获得
        2.2.2 基因克隆
        2.2.3 基因特异性sgRNA的设计及体外转录
        2.2.4 Cas9的获得
        2.2.5 胚胎的显微注射和突变个体的筛选
        2.2.6 突变体品系的筛选及验证
    2.3 Dicer功能的研究
        2.3.1 敲除品系的形态学观察及分析
        2.3.2 基于PxDcr-2敲除品系的RNAi
3 结果与分析
    3.1 Px Dcr-1和PxDcr-2的序列特征及靶点
    3.2 小菜蛾Dicer突变品系
        3.2.1 基因突变类型
        3.2.2 突变品系
    3.3 Dicer突变对小菜蛾的影响
        3.3.1 对生殖的影响
        3.3.2 对生存和发育的影响
    3.4 PxDcr-2敲除对RNAi的影响
        3.4.1 对Pxyellow RNAi的影响
        3.4.2 对Pxwhite RNAi的影响
4 总结与讨论
    4.1 Dicer与生殖及生长调控
    4.2 Dcr-2与RNAi通路
参考文献
附录
    附录A 主要仪器
    附录B 小菜蛾Dicer序列
    附录C 敲除品系筛选峰图
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]CRISPR/Cas9基因组编辑技术在HIV-1感染治疗中的应用进展[J]. 韩英伦,李庆伟.  遗传. 2016(01)
[2]CRISPR/Cas9介导的基因组定点编辑技术[J]. 方锐,畅飞,孙照霖,李宁,孟庆勇.  生物化学与生物物理进展. 2013(08)
[3]Dicer结构和功能研究进展[J]. 彭杰军,燕飞,陈海如,陈剑平.  遗传. 2008(12)
[4]RNA诱导沉默复合体中的生物大分子及其装配[J]. 宋雪梅,燕飞,杜立新.  遗传. 2006(06)

硕士论文
[1]小菜蛾RNAi通路核心元件的基因组筛选及PxDcr-2基因的功能验证[D]. 沈修婧.福建农林大学 2016



本文编号：3204774