基于RNAi抗PRSV番木瓜株系的培育及其分子特征验证
发布时间：2022-02-12 14:40
番木瓜（Carica papaya L.）广泛种植于热带和亚热带地区,番木瓜环斑病毒（Papayaringspot virus,PRSV）是主要的番木瓜病害,并严重制约着番木瓜产业的可持续发展。对于防治番木瓜环斑病最直接有效的措施是种植抗病品种。在番木瓜栽培品种尚未发现具有抗病性的品系,有些野生型品种具有抗性,但是由于存在生殖隔离无法通过杂交育种方法将抗性转移到商业化种植的番木瓜品种中。由于PRSV存在地理株,目前转基因番木瓜采用序列同源依赖抗病性,因此转夏威夷或台系湾PRSV外壳蛋白基因的品种只对夏威夷或台湾的PRSV株系具有抗性。对于海南的PRSV株系进行调查分析发现,海南PRSV分离株与其他地区的株系差异性较大,迫切需要培养抗海南PRSV番木瓜新种质。本研究中,根据RNAi策略利用海南PRSV-CP基因保守序列构建抗海南番木瓜环斑病毒植物表达载体pCAMBIA2300-35S-CP-RNAi-OCS,通过基因枪法将载体导入番木瓜的愈伤组织中,经卡那霉素抗性筛选后再分化成为植株。进而描述阳性转化植株474株系的分子特征同时进行抗病毒试验分析其抗病性。Southern分析和微滴数字P...
【文章来源】：海南大学海南省211工程院校
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１番木瓜植株的不同性别类型
基于ＲＮＡｉ抗ＰＲＳＶ番木瓜株系的培育及其分子特征验证科植物；然而，Ｗ型株系（ＰＲＳＶ－Ｗ）在自然环境中仅能侵染葫芦科番木瓜（Ｂａｕ?ｅｔ?ａ丨．，２００３）。ＰＲＳＶ已被证实还能侵染罗汉果??／／）（Ｌｉａｏｅｌａｔ．，?２００５；朱静等，２０１４）。番木瓜环斑病毒在我国于１９５９报道（任佩瑜和范怀忠，１９６４），迄今为止ＰＲＳＶ已广泛流行于世界产区，严重限制着番木瓜产业持续蓬勃的发展。因而，研制抗ＰＲＳＶ是防治ＰＲＳＶ最根本有效的途径。??
图４?ＲＮＡｉ作用机制??Ｆｉｇ．４?Ｔｈｅ?ｍｅｃｈａｎｉｓｍ?ｏｆ?ＲＮＡｉ??１．２．２?ＲＮＡｉ?特点??ＲＮＡｉ是表现在转录水平上的基因沉默，内含子转录后不能生成成熟故以内含子为靶向的基因干扰是无效果，其作用过程具有以下几个特点：??（１）特异性。根据碱基互补配对特异性的识别并降解同源的基因组转ｍＲＮＡ，不影响非同源序列的ｍＲＮＡ。对于ｍＲＮＡ的同源性要求比较高，高作用效果越明显，即使只有ｌｂｐ的改变或者错配都会大大降低ｓｉＲＮＡ的〇８１〇１１１１１１＾１１＜；３１１＾，６１３丨．，２００２），因而对病毒的突变很敏感。然而，有些病毒１对ｓｉＲＮＡ不敏感，可能原因是ＲＮＡ的构象从而影响ＲＩＳＣ的识别。??（２）高效性。根据ＲＮＡｉ作用机制，ＲＮＡｉ过程一旦在细胞中启动，会应的速度成倍的放大和扩增信号，极少量的ｄｓＲＮＡ就可以达到基因沉默效类似生物催化酶反应的高效的特性。实验中发现ｌ－ｌ〇〇ｎｍｏｌ／Ｌ的ｄｓＲＮＡ对是一的Ｈｏｌｅｎ?ｅｔ?ａ丨．，２００２。??
【参考文献】：
期刊论文
[1]番木瓜环斑病毒海南株系植物RNAi表达载体的构建[J]. 赵辉,张雨良,孔华,贾瑞宗,朱芸,郭安平,曾会才,彭明. 热带作物学报. 2015(12)
[2]番木瓜病虫害防治[J]. 郁建强. 农家之友. 2015(11)
[3]GFLV CP基因RNAi载体构建及其在转基因烟草中的干涉效果[J]. 田莉莉,牛良. 华北农学报. 2014(S1)
[4]云南番木瓜环斑病毒的发生及遗传多样性[J]. 朱静,谭冠林,包改丽,刘芳,李晓静,吴祖建,李凡. 微生物学通报. 2014(06)
[5]海南番木瓜PRSV和PLDMV病毒发生情况及分子鉴定[J]. 张雨良,黄启星,郭安平,曾会才,赵辉,孔华,刘志昕. 热带作物学报. 2013(12)
[6]抗TMV、CMV转基因烟草的初步选育[J]. 杨晓朱,林爵平,李华平. 广东农业科学. 2011(12)
[7]dsRNA介导的番木瓜环斑病毒（PRSV）的抗病性研究[J]. 张帆,姜玲. 植物科学学报. 2011(03)
[8]转PRSV复制酶基因番木瓜食品安全性的初步评价[J]. 阮小蕾,侯燕,李华平. 华中农业大学学报. 2010(03)
[9]转WMV-2 CP基因西瓜的安全性评价[J]. 应奇才,薛大伟,徐祥彬,施农农,王慧中. 浙江农业科学. 2009(05)
[10]VIGS介导的转复制酶基因番木瓜对PRSV的抗性[J]. 阮小蕾,王加峰,李华平. 华中农业大学学报. 2009(04)
博士论文
[1]番木瓜畸形花叶病毒检测鉴定及侵染性克隆构建与应用[D]. 庹德财.海南大学 2015
[2]RNAi调控玉米抗甘蔗花叶病毒和粗缩病毒的研究[D]. 甘德芳.安徽农业大学 2011
[3]转ScMV-CP基因甘蔗抗病的分子基础及环境安全性评价[D]. 阮妙鸿.福建农林大学 2007
[4]番木瓜花粉管转基因技术及RNA介导广谱抗病性的初步研究[D]. 魏军亚.华南热带农业大学 2006
[5]转核酶基因、反义和正义CMV-CP基因番茄的抗黄瓜花叶病毒（CMV）研究[D]. 朱秋菊.中国科学院研究生院（植物研究所） 2005
硕士论文
[1]原核表达的dsRNA诱导番木瓜畸型花叶病毒抗性的研究[D]. 张涛.海南大学 2014
[2]石斛兰文心兰转CyMV-CP、ORSV-CP基因研究[D]. 张振华.海南大学 2011
[3]兰花转CiDREB1、PeDREB2、CyMV-CP基因研究[D]. 王涛.河北农业大学 2010
[4]广东省番木瓜病原真菌鉴定及生物学特性研究[D]. 杜宜新.山东农业大学 2006
本文编号：3621902
【文章来源】：海南大学海南省211工程院校
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１番木瓜植株的不同性别类型
基于ＲＮＡｉ抗ＰＲＳＶ番木瓜株系的培育及其分子特征验证科植物；然而，Ｗ型株系（ＰＲＳＶ－Ｗ）在自然环境中仅能侵染葫芦科番木瓜（Ｂａｕ?ｅｔ?ａ丨．，２００３）。ＰＲＳＶ已被证实还能侵染罗汉果??／／）（Ｌｉａｏｅｌａｔ．，?２００５；朱静等，２０１４）。番木瓜环斑病毒在我国于１９５９报道（任佩瑜和范怀忠，１９６４），迄今为止ＰＲＳＶ已广泛流行于世界产区，严重限制着番木瓜产业持续蓬勃的发展。因而，研制抗ＰＲＳＶ是防治ＰＲＳＶ最根本有效的途径。??
图４?ＲＮＡｉ作用机制??Ｆｉｇ．４?Ｔｈｅ?ｍｅｃｈａｎｉｓｍ?ｏｆ?ＲＮＡｉ??１．２．２?ＲＮＡｉ?特点??ＲＮＡｉ是表现在转录水平上的基因沉默，内含子转录后不能生成成熟故以内含子为靶向的基因干扰是无效果，其作用过程具有以下几个特点：??（１）特异性。根据碱基互补配对特异性的识别并降解同源的基因组转ｍＲＮＡ，不影响非同源序列的ｍＲＮＡ。对于ｍＲＮＡ的同源性要求比较高，高作用效果越明显，即使只有ｌｂｐ的改变或者错配都会大大降低ｓｉＲＮＡ的〇８１〇１１１１１１＾１１＜；３１１＾，６１３丨．，２００２），因而对病毒的突变很敏感。然而，有些病毒１对ｓｉＲＮＡ不敏感，可能原因是ＲＮＡ的构象从而影响ＲＩＳＣ的识别。??（２）高效性。根据ＲＮＡｉ作用机制，ＲＮＡｉ过程一旦在细胞中启动，会应的速度成倍的放大和扩增信号，极少量的ｄｓＲＮＡ就可以达到基因沉默效类似生物催化酶反应的高效的特性。实验中发现ｌ－ｌ〇〇ｎｍｏｌ／Ｌ的ｄｓＲＮＡ对是一的Ｈｏｌｅｎ?ｅｔ?ａ丨．，２００２。??
【参考文献】：
期刊论文
[1]番木瓜环斑病毒海南株系植物RNAi表达载体的构建[J]. 赵辉,张雨良,孔华,贾瑞宗,朱芸,郭安平,曾会才,彭明. 热带作物学报. 2015(12)
[2]番木瓜病虫害防治[J]. 郁建强. 农家之友. 2015(11)
[3]GFLV CP基因RNAi载体构建及其在转基因烟草中的干涉效果[J]. 田莉莉,牛良. 华北农学报. 2014(S1)
[4]云南番木瓜环斑病毒的发生及遗传多样性[J]. 朱静,谭冠林,包改丽,刘芳,李晓静,吴祖建,李凡. 微生物学通报. 2014(06)
[5]海南番木瓜PRSV和PLDMV病毒发生情况及分子鉴定[J]. 张雨良,黄启星,郭安平,曾会才,赵辉,孔华,刘志昕. 热带作物学报. 2013(12)
[6]抗TMV、CMV转基因烟草的初步选育[J]. 杨晓朱,林爵平,李华平. 广东农业科学. 2011(12)
[7]dsRNA介导的番木瓜环斑病毒（PRSV）的抗病性研究[J]. 张帆,姜玲. 植物科学学报. 2011(03)
[8]转PRSV复制酶基因番木瓜食品安全性的初步评价[J]. 阮小蕾,侯燕,李华平. 华中农业大学学报. 2010(03)
[9]转WMV-2 CP基因西瓜的安全性评价[J]. 应奇才,薛大伟,徐祥彬,施农农,王慧中. 浙江农业科学. 2009(05)
[10]VIGS介导的转复制酶基因番木瓜对PRSV的抗性[J]. 阮小蕾,王加峰,李华平. 华中农业大学学报. 2009(04)
博士论文
[1]番木瓜畸形花叶病毒检测鉴定及侵染性克隆构建与应用[D]. 庹德财.海南大学 2015
[2]RNAi调控玉米抗甘蔗花叶病毒和粗缩病毒的研究[D]. 甘德芳.安徽农业大学 2011
[3]转ScMV-CP基因甘蔗抗病的分子基础及环境安全性评价[D]. 阮妙鸿.福建农林大学 2007
[4]番木瓜花粉管转基因技术及RNA介导广谱抗病性的初步研究[D]. 魏军亚.华南热带农业大学 2006
[5]转核酶基因、反义和正义CMV-CP基因番茄的抗黄瓜花叶病毒（CMV）研究[D]. 朱秋菊.中国科学院研究生院（植物研究所） 2005
硕士论文
[1]原核表达的dsRNA诱导番木瓜畸型花叶病毒抗性的研究[D]. 张涛.海南大学 2014
[2]石斛兰文心兰转CyMV-CP、ORSV-CP基因研究[D]. 张振华.海南大学 2011
[3]兰花转CiDREB1、PeDREB2、CyMV-CP基因研究[D]. 王涛.河北农业大学 2010
[4]广东省番木瓜病原真菌鉴定及生物学特性研究[D]. 杜宜新.山东农业大学 2006
本文编号：3621902
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