家蚕核型多角体病毒（BmNPV）bm58α和bm109基因功能研究
发布时间：2022-07-13 14:43
杆状病毒是发现最早、研究最多且实用意义很大的昆虫病毒。其中家蚕核型多角体病毒（Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,简写BmNPV）是家蚕主要病害-血液型脓病的主要病原,每年给蚕桑业造成巨大的经济损失。由于对于BmNPV侵染增殖机制研究并不深入,迄今为止对于其感染家蚕导致的核型多角体病仍无有效控制的方法。虽然杆状病毒大多数基因的功能已经被阐明,然而仍有部分基因在病毒生活史中的作用未知,这严重制约了对该病毒感染分子机制的深入了解。本研究以BmNPV两个保守基因但功能仍然未知的基因,bm55a和bm109,作为研究对象,对其转录、表达以及亚细胞定位与病毒结构定位进行了系统研究,进一步利用Bac-to-Bac系统和Red同源重组系统,构建了基因缺失的重组病毒,阐明了它们在病毒生活史中所起的生物学功能。主要结论如下:1.BmNPV b58a基因的研究。bm58a基因位于BmNPV基因组nt 56,183-nt 56,310处,全长183 bp,编码60个氨基酸。RT-PCR分析表明,病毒感染后24h可检测到其转录产物,蛋白印迹结果显示病毒感染后24h可检测到Bm58...
【文章页数】：106 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
英文缩略表
第一章 文献综述
1.1 杆状病毒研究概论
1.1.1 杆状病毒简介
1.1.2 杆状病毒的分类
1.1.3 杆状病毒的基因组特征
1.1.4 杆状病毒的结构特征
1.1.5 杆状病毒的生活史
1.2 杆状病毒的分子生物学研究
1.2.1 杆状病毒的RNA转录及DNA复制相关基因
1.2.2 杆状病毒主要结构蛋白基因
1.2.3 杆状病毒感染后期扩散相关基因
1.3 A-RED重组系统概述
1.4 研究目的与意义
第二章 家蚕核型多角体病毒bm58α的研究
2.1 材料与方法
2.1.1 病毒,细胞和昆虫
2.1.2 试剂与仪器
2.1.3 实验方法
2.2 结果与分析
2.2.1 bm58α生物信息学分析
2.2.2 bm58α的转录时相分析
2.2.3 重组病毒的构建
2.2.4 对重组病毒vBm~(bm-58a-KO-PH-GFP),vBm~(bm-58aHA-REP-PH-GFP)和vBm~(PH-GFP)在BmN细胞中的复制分析
2.2.5 重组病毒vBm~(bm-58a-KO-PH-GFP),vBm~(bm-58aHA-REP-PH-GFP)和vBm~(PH-GFP)感染导致的细胞病变效应
2.2.6 Bm58a的表达时相分析
2.2.7 重组病毒转染细胞的电镜观察
2.2.8 Bm58a的亚细胞定位
2.2.9 重组病毒感染家蚕的生物学分析
2.3 讨论
2.4 小结
第三章 家蚕核型多角体病毒bm109的研究
3.1 材料与方法
3.1.1 病毒,细胞和昆虫
3.1.2 试剂与仪器
3.1.3 实验方法
3.2 结果与分析
3.2.1 bm109生物信息学分析
3.2.2 bm109的转录时相分析
3.2.3 重组病毒的构建
3.2.4 对重组病毒vBm~(bm-109-KO-PH-GFP),vBm~(bm-109HA-REP-PH-GFP)和vBm~(PH-GFP)在BmN细胞中的复制分析
3.2.5 病毒基因组DNA复制的分析
3.2.6 Bm109的表达时相分析及亚细胞定位
3.2.7 Bm109在病毒粒子结构组分中的定位
3.2.8 重组病毒转染细胞的电镜观察
3.2.9 bm109的缺失对病毒基因表达的影响
3.2.10 Bm109不同的片段的截短对病毒的影响
3.2.11 酵母双杂交验证Bm109与病毒结构蛋白的相互作用
3.3 讨论
3.4 小结
研究总结与工作展望
参考文献
附图 (实验载体图谱)
致谢
博士期间发表论文目录
【参考文献】：
期刊论文
[1]原核微生物基因敲除策略的研究进展[J]. 阳燕,杨英明,胡涛. 国际口腔医学杂志. 2016(05)
[2]构建重组杆状病毒的几种新方法[J]. 施先宗，陈曲侯. 生物化学与生物物理进展. 1995(02)
博士论文
[1]苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（AcMNPV）odv-e25的分子生物学[D]. 陈琳.浙江大学 2013
[2]基于转基因工程的家蚕核型多角体病毒（BmNPV）抗性素材创新及抗性机制研究[D]. 蒋亮.西南大学 2013
硕士论文
[1]BmNPV感染对家蚕幼虫中肠围食膜的影响[D]. 刘博.西南大学 2012
本文编号：3660230
【文章页数】：106 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
英文缩略表
第一章 文献综述
1.1 杆状病毒研究概论
1.1.1 杆状病毒简介
1.1.2 杆状病毒的分类
1.1.3 杆状病毒的基因组特征
1.1.4 杆状病毒的结构特征
1.1.5 杆状病毒的生活史
1.2 杆状病毒的分子生物学研究
1.2.1 杆状病毒的RNA转录及DNA复制相关基因
1.2.2 杆状病毒主要结构蛋白基因
1.2.3 杆状病毒感染后期扩散相关基因
1.3 A-RED重组系统概述
1.4 研究目的与意义
第二章 家蚕核型多角体病毒bm58α的研究
2.1 材料与方法
2.1.1 病毒,细胞和昆虫
2.1.2 试剂与仪器
2.1.3 实验方法
2.2 结果与分析
2.2.1 bm58α生物信息学分析
2.2.2 bm58α的转录时相分析
2.2.3 重组病毒的构建
2.2.4 对重组病毒vBm~(bm-58a-KO-PH-GFP),vBm~(bm-58aHA-REP-PH-GFP)和vBm~(PH-GFP)在BmN细胞中的复制分析
2.2.5 重组病毒vBm~(bm-58a-KO-PH-GFP),vBm~(bm-58aHA-REP-PH-GFP)和vBm~(PH-GFP)感染导致的细胞病变效应
2.2.6 Bm58a的表达时相分析
2.2.7 重组病毒转染细胞的电镜观察
2.2.8 Bm58a的亚细胞定位
2.2.9 重组病毒感染家蚕的生物学分析
2.3 讨论
2.4 小结
第三章 家蚕核型多角体病毒bm109的研究
3.1 材料与方法
3.1.1 病毒,细胞和昆虫
3.1.2 试剂与仪器
3.1.3 实验方法
3.2 结果与分析
3.2.1 bm109生物信息学分析
3.2.2 bm109的转录时相分析
3.2.3 重组病毒的构建
3.2.4 对重组病毒vBm~(bm-109-KO-PH-GFP),vBm~(bm-109HA-REP-PH-GFP)和vBm~(PH-GFP)在BmN细胞中的复制分析
3.2.5 病毒基因组DNA复制的分析
3.2.6 Bm109的表达时相分析及亚细胞定位
3.2.7 Bm109在病毒粒子结构组分中的定位
3.2.8 重组病毒转染细胞的电镜观察
3.2.9 bm109的缺失对病毒基因表达的影响
3.2.10 Bm109不同的片段的截短对病毒的影响
3.2.11 酵母双杂交验证Bm109与病毒结构蛋白的相互作用
3.3 讨论
3.4 小结
研究总结与工作展望
参考文献
附图 (实验载体图谱)
致谢
博士期间发表论文目录
【参考文献】：
期刊论文
[1]原核微生物基因敲除策略的研究进展[J]. 阳燕,杨英明,胡涛. 国际口腔医学杂志. 2016(05)
[2]构建重组杆状病毒的几种新方法[J]. 施先宗，陈曲侯. 生物化学与生物物理进展. 1995(02)
博士论文
[1]苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（AcMNPV）odv-e25的分子生物学[D]. 陈琳.浙江大学 2013
[2]基于转基因工程的家蚕核型多角体病毒（BmNPV）抗性素材创新及抗性机制研究[D]. 蒋亮.西南大学 2013
硕士论文
[1]BmNPV感染对家蚕幼虫中肠围食膜的影响[D]. 刘博.西南大学 2012
本文编号：3660230
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/dzwbhlw/3660230.html
