减毒病毒CHV1在植物细胞与真菌细胞中的跨界传播

发布时间：2022-09-28 14:52

　　真菌细胞内存在着种类诸多的病毒或病毒类复制因子,统称为真菌病毒。少部分真菌病毒能够抑制寄主真菌的致病能力,引起病原菌致病力衰退。由于真菌病毒具有弱毒的特性,是一种重要的生防菌资源,因而受到了国内外植保科学研究者的广泛关注。自然界中真菌病毒的传播途径主要通过真菌菌丝融合进行水平传播,或者通过分生孢子进行垂直传播。然而,病原真菌常发生营养体不亲和反应,营养体不亲和性菌株在菌丝接触时会诱导细胞发生程序性死亡,阻碍真菌病毒在不同菌株中扩散,进而影响了真菌病毒的生防效果。为明确真菌病毒是否可以感染植物细胞,以植物为介体在真菌和植物间跨界传播。本研究利用真菌-植物-病毒互作研究体系得出以下结论:1.分别筛选了4种真菌病毒,包括减毒病毒属（Hypoviridae）的两个病毒:板栗疫病菌减毒病毒1（Cryphonectria hypovirus 1,CHV1）和链格孢菌减毒病毒1（Alternalia atanata hypovirus 1,Aa HV1）,及葡萄座腔菌病毒1（Botryosphaeria dothidea virus 1,Bd V1）和ds RNA线粒体真菌病毒立枯丝核菌线粒体病毒3... 

【文章页数】：99 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
主要符号对照表
第一章 文献综述
    1.1 真菌病毒
        1.1.1 真菌病毒简介
        1.1.2 真菌病毒起源与进化
    1.2 减毒真菌病毒CHV1
        1.2.1 减毒真菌病毒的发现
        1.2.2 减毒病毒CHV1基因组特征
    1.3 真菌病毒的生物防治
    1.4 真菌病毒的传播方式
        1.4.1 真菌病毒的垂直传播
        1.4.2 真菌病毒的水平传播
        1.4.3 真菌病毒的胞外传播
    1.5 病毒跨界侵染现象
    1.6 本研究的目的和意义
第二章 减毒病毒CHV1在植物细胞中复制
    2.1 材料、试剂和仪器
        2.1.1 实验材料和处理
        2.1.2 实验试剂及培养基
        2.1.3 实验仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 真菌病毒总RNA的提取
        2.2.2 减毒病毒CHV1正义链体外转录物的制备
        2.2.3 真菌病毒摩擦接种普通烟
        2.2.4 植物单链RNA的提取
        2.2.5 真菌病毒侵染普通烟RT-PCR检测
        2.2.6 检测CHV1在普通烟接种叶中的复制情况
    2.3 实验结果
        2.3.1 筛选能够侵染普通烟的真菌病毒
        2.3.2 减毒病毒CHV1体外转录物侵染普通烟
        2.3.3 分析减毒病毒CHV1的寄主范围
        2.3.4 真菌来源的减毒病毒CHV1在普通烟细胞中复制
        2.3.5 减毒病毒CHV1不能自发地系统性侵染普通烟
    2.4 讨论与分析
第三章 外源运动蛋白协助减毒病毒CHV1系统性侵染植物
    3.1 材料、试剂和仪器
        3.1.1 实验材料和处理
        3.1.2 实验试剂及培养基
        3.1.3 实验仪器
    3.2 实验方法
        3.2.1 减毒病毒CHV1与植物病毒复合侵染普通烟
        3.2.2 减毒病毒CHV1与TMV复合侵染普通烟继代实验
        3.2.3 减毒病毒CHV1侵染普通烟-30K
        3.2.4 减毒病毒CHV1-GFP及 CHV1 缺失突变体侵染性克隆结构
        3.2.5 减毒病毒CHV1-GFP侵染普通烟-30K
        3.2.6 减毒病毒CHV1野生型及缺失突变体侵染普通烟-30K
        3.2.7 减毒病毒AaHV1摩擦接种普通烟-30K
    3.3 实验结果
        3.3.1 减毒病毒CHV1与植物病毒复合侵染普通烟
        3.3.2 植物病毒与CHV1复合侵染不影响自身复制
        3.3.3 减毒病毒CHV1与植物病毒复合侵染普通烟继代实验
        3.3.4 减毒病毒CHV1系统性侵染普通烟-30K
        3.3.5 减毒病毒CHV1在植物细胞中的分布
        3.3.6 减毒病毒AaHV1侵染普通烟-30K
        3.3.7 减毒病毒CHV1在普通烟-30K全植株中分布
        3.3.8 减毒病毒CHV1缺失突变体侵染普通烟-30K
        3.3.9 减毒病毒CHV1野生型及缺失突变体在普通烟-30K中积累量比较
        3.3.10 植物病毒TMV增加CHV1 及缺失突变体在植物细胞中的积累量
    3.4 讨论与分析
第四章 减毒病毒CHV1 与植物病毒TMV在禾谷镰刀菌Fusarium graminearum中复制
    4.1 材料、试剂和仪器
        4.1.1 实验材料和处理
        4.1.2 实验试剂
        4.1.3 实验仪器
    4.2 实验方法
        4.2.1 植物病毒TMV病毒粒子粗提
        4.2.2 禾谷镰刀菌PH-1原生质体转化
        4.2.3 转化子的初筛和鉴定
        4.2.4 真菌双链RNA的提取
        4.2.5 真菌单链RNA的提取
        4.2.6 分析CHV1及缺失突变体在PH-1野生型中的积累量
        4.2.7 减毒病毒CHV1 及缺失突变体与TMV复合侵染PH-1 野生型
        4.2.8 蛋白水平检测TMV在禾谷镰刀菌中的表达情况
    4.3 实验结果
        4.3.1减毒病毒CHV1及其缺失突变体侵染禾谷镰刀菌PH-1
        4.3.2 减毒病毒CHV1及缺失突变体在PH-1野生型中积累量比较
        4.3.3 植物病毒TMV侵染禾谷镰刀菌PH-1野生型
        4.3.4 减毒病毒CHV1 增加TMV在 PH-1 中的积累
        4.3.5 真菌RNA沉默机制抑制TMV在禾谷镰刀菌中的积累
    4.4 讨论与分析
第五章 TMV帮助CHV1 在植物和真菌间跨界传播
    5.1 材料、试剂和仪器
        5.1.1 实验材料和处理
        5.1.2 实验试剂
        5.1.3 实验仪器
    5.2 实验方法
        5.2.1 检测CHV1从真菌细胞传播到植物细胞中
        5.2.2 拟轮枝镰孢菌与禾谷镰刀菌营养亲和型分析
        5.2.3 禾谷镰刀菌野生型与拟轮枝镰孢菌接种普通烟
        5.2.4 菌株的分离培养和检测
    5.3 实验结果
        5.3.1 植物病毒帮助减毒病毒CHV1从真菌向植物传播
        5.3.2 减毒病毒CHV1不能在营养不亲和型菌株间水平传播
        5.3.3 植物病毒TMV帮助CHV1 借助植物在营养不亲和菌株间传播
        5.3.4 减毒病毒CHV1帮助真菌从植物获得植物病毒
    5.4 讨论与分析
全文总结与讨论
参考文献
附录 A
致谢
个人简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]宏基因组学:热带冬季瓜菜病害生物防治新策略[J]. 赵志祥,陈圆,肖敏,陈绵才.  分子植物育种. 2015(05)
[2]安徽省油菜菌核病菌对多菌灵的抗药性监测[J]. 齐永霞,陈方新,苏贤岩,丁克坚,于杰,江茂盛.  中国农学通报. 2006(09)
[3]油菜菌核病菌对多菌灵的抗药性监测[J]. 石志琦,周明国,叶钟音,史建荣,陈怀谷,王裕中.  江苏农业学报. 2000(04)

博士论文
[1]核盘菌两个新型RNA病毒基因组的分子生物学特性研究[D]. 刘荣.华中农业大学 2015

硕士论文
[1]侵染马铃薯立枯丝核菌病毒的筛选、鉴定及生物学性状分析[D]. 杨柳.西北农林科技大学 2019



本文编号：3681864