葡萄病程相关蛋白PR4b抗霜霉病功能研究

发布时间：2022-10-30 10:54

　　葡萄霜霉病是葡萄中最严重的真菌病害之一,严重影响着世界各地的葡萄生产。病程相关蛋白（Pathogenesis-related protein,PR）在植物抗病性中起着重要的作用,然而,关于其在葡萄抗霜霉病方面的研究很少。本研究前期对高抗霜霉病的中国野生葡萄‘留坝-8’和易感霜霉病欧洲葡萄‘黑比诺’接种霜霉菌不同时期的叶片进行了转录组测序。PR4b是在转录组测序中筛选到的一个在霜霉菌诱导上调表达的基因。本研究以Vp PR4b为基础,分析其结构特点以及亚细胞定位。然后,利用CRISPR/Cas9系统获得‘无核白’Vv PR4b基因编辑葡萄苗,对基因编辑株系的叶盘接种葡萄霜霉菌,验证PR4在葡萄霜霉菌侵染过程中的作用。进一步分析了Vp PR4b启动子顺式作用元件,通过酵母单杂交初步筛选Vp PR4b的上游调控因子。主要取得以下结果:（1）中国野生葡萄Vp PR4b和欧洲葡萄Vv PR4b基因均受霜霉菌的诱导表达,表达模式类似。Vp PR4b和Vv PR4b均含有432个核苷酸,编码143个氨基酸;氨基酸序列分析发现,Vp PR4b和Vv PR4b均属于Ⅱ类PR4,N端有信号肽,C端有Barw... 

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
    1.1 葡萄霜霉病的研究进展
    1.2 病程相关蛋白的研究进展
    1.3 CRISPR/Cas9 研究进展
    1.4 本研究的目的和意义
第二章 VpPR4b的功能分析
    2.1 试验材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 质粒载体和菌株
        2.1.3 试剂与仪器
        2.1.4 培养基和试剂配制
    2.2 试验方法
        2.2.1 葡萄霜霉菌的收集与接种
        2.2.2 PR4b受霜霉菌诱导表达分析
        2.2.3 VpPR4b和 VvPR4b表达载体的构建
        2.2.4 瞬时转化烟草叶片
        2.2.5 蛋白表达检测
        2.2.6 CRISPR/Cas9 基因编辑的转化体系建立
        2.2.7 基因编辑葡萄检测
        2.2.8 基因编辑葡萄抗病功能分析
        2.2.9 引物
    2.3 结果与分析
        2.3.1 PR4b受霜霉菌诱导的表达分析
        2.3.2 中国野生葡萄VpPR4b和欧洲葡萄VvPR4b的克隆
        2.3.3 VpPR4b的定位分析
        2.3.4 CRISPR/Cas9 基因编辑的转化体系建立
        2.3.5 基因编辑葡萄苗检测
        2.3.6 基因编辑葡萄抗霜霉病的功能鉴定
    2.4 讨论
第三章 VpPR4b启动子功能研究
    3.1 试验材料
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 质粒载体和菌株
        3.1.3 试剂与仪器
        3.1.4 培养基和试剂配制
    3.2 试验方法
        3.2.1 VpPR4b和 VvPR4b启动子克隆
        3.2.2 VpPR4b启动子活性分析
        3.2.3 酵母单杂交筛库
        3.2.4 引物
    3.3 结果与分析
        3.3.1 VpPR4b和 VvPR4b启动子克隆
        3.3.2 VpPR4b启动子活性分析
        3.3.3 VpPR4b启动子酵母单杂交筛库
        3.3.4 VpPR4b启动子互作验证
    3.4 讨论
第四章 结论
参考文献
致谢
个人简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]NO和H2O2提高葡萄抗霜霉病的生理作用机制[J]. 林志强,郭秀萍,车永梅,卢江,刘新.  植物病理学报. 2011(06)
[2]欧亚种葡萄品种对霜霉病感病性的研究[J]. 李华.  园艺学报. 1988(01)



本文编号：3698758