班氏跳小蜂气味结合蛋白嗅觉功能分析

发布时间：2022-10-30 18:01

　　班氏跳小蜂（Aenasius bambawalei Hayat）是入侵性害虫扶桑绵粉蚧的重要寄生性天敌,对扶桑绵粉蚧有较好的防治潜能,但该寄生蜂的寄主定位机制尚不清楚。一般认为,昆虫气味结合蛋白（Odorant binding proteins,OBPs）对运输气味分子具有重要作用。如果能够明确班氏跳小蜂OBPs与相关气味分子的结合特性,将对解析该蜂的寄主定位机制提供理论基础。本研究以班氏跳小蜂为研究对象,在已获得的转录组数据的基础上,对AbamOBP17和Abam OBP28基因进行克隆和表达量测定;进一步对AbamOBP17和Abam OBP28进行体外纯化并获得重组纯蛋白;在此基础上进行AbamOBP17和Abam OBP28与27种棉花挥发物的荧光竞争性结合实验;然后进行AbamOBP17和Abam OBP28与8种挥发物的圆二色谱分析;最后通过Y型嗅觉仪和RNA干扰技术,筛选获得了对该蜂具有行为活性的物质。研究结果为探索Abam OBPs的功能提供了理论依据。主要研究结果如下:1.班氏跳小蜂Abam OBPs基因克隆和表达量测定利用RT-PCR技术成功克隆AbamOBP17和... 

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
缩略语表
第一章 文献综述
    1.1 扶桑绵粉蚧及其天敌班氏跳小蜂
        1.1.1 扶桑绵粉蚧
        1.1.2 班氏跳小蜂
        1.1.3 班氏跳小蜂对扶桑绵粉蚧的控制作用
    1.2 昆虫的嗅觉
        1.2.1 昆虫的嗅觉感受系统
        1.2.2 昆虫嗅觉蛋白
    1.3 气味结合蛋白
        1.3.1 气味结合蛋白的特征
        1.3.2 气味结合蛋白的功能
        1.3.3 气味结合蛋白与配基的结合与释放
    1.4 气味结合蛋白与配基相互作用的研究
        1.4.1 蛋白与物质结合能力的测定
        1.4.2 蛋白结合过程构象变化的研究
    1.5 研究目的与意义
    技术路线
第二章 班氏跳小蜂AbamOBPs基因克隆和表达量测定
    2.1 材料与方法
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 班氏跳小蜂总RNA的提取
        2.1.3 班氏跳小蜂cDNA的合成
        2.1.4 班氏跳小蜂AbamOBPs基因的克隆
        2.1.5 班氏跳小蜂AbamOBPs基因表达量测定
    2.2 结果与分析
        2.2.1 班氏跳小蜂AbamOBPs基因的克隆
        2.2.2 班氏跳小蜂AbamOBPs基因表达量测定
    2.3 讨论
第三章 班氏跳小蜂AbamOBPs的表达纯化和结合特性分析
    3.1 材料与方法
        3.1.1 实验材料
        3.1.2 AbamOBP17和AbamOBP28 的原核表达及纯化
        3.1.3 AbamOBPs与配基结合特性分析
    3.2 结果与分析
        3.2.1 重组表达载体的构建
        3.2.2 目的蛋白的原核表达及纯化
        3.2.3 AbamOBPs与配基结合特性分析
    3.3 讨论
第四章 行为活性物质的筛选及AbamOBP17 功能验证
    4.1 材料与方法
        4.1.1 实验材料
        4.1.2 dsRNA的合成
        4.1.3 dsRNA注射
        4.1.4 qPCR检测和分析
        4.1.5 干扰前和干扰后Y型嗅觉仪实验
    4.2 结果与分析
        4.2.1 干扰前班氏跳小蜂雌雄蜂的行为反应
        4.2.2 干扰后AbamOBP17 基因的特异性表达
        4.2.3 RNA干扰后对活性物质的行为反应
    4.3 讨论
第五章 结果,讨论与展望
    5.1 结果与讨论
    5.2 展望
参考文献
硕士期间发表的学术论文
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]扶桑绵粉蚧在广西的发生为害情况调查[J]. 孟醒,李金峰,黄立飞,姜建军,杨朗,周忠实,桂富荣,陈斌,陈红松.  南方农业学报. 2019(05)
[2]云南扶桑绵粉蚧的发生及防治[J]. 孟醒,桂富荣,陈斌.  生物安全学报. 2018(04)
[3]扶桑绵粉蚧对河北省棉花的入侵风险及预防建议[J]. 葛朝红,刘彦霞,周永萍,邓素花,师树新.  天津农林科技. 2018(04)
[4]美洲斑潜蝇气味结合蛋白OBP13的鉴定与功能[J]. 陈东凯,张林雅,邢振龙,雷仲仁.  中国农业科学. 2018(05)
[5]不同生殖方式对班氏跳小蜂寄生率和子代性比的影响[J]. 张娟,黄俊,吕要斌.  环境昆虫学报. 2016(04)
[6]扶桑绵粉蚧取食为害对棉花萜类化合物释放的影响[J]. 黄俊,张娟,吕要斌.  环境昆虫学报. 2016(04)
[7]家蚕化学感受蛋白CSP16的表达及结合特性分析[J]. 郭兴国,陈莹,邢秋婷,邢万静,阚云超,乔惠丽.  昆虫学报. 2016(06)
[8]暗黑鳃金龟气味结合蛋白HparOBP15a基因的克隆及功能分析[J]. 房迟琴,张鑫鑫,刘丹丹,李克斌,张帅,曹雅忠,樊东,尹姣.  昆虫学报. 2016(03)
[9]紫薯花色苷-蛋白复合物的制备及结构表征[J]. 郭莹,江甜,李书艺,祝振洲,何静仁.  食品科学. 2016(21)
[10]班氏跳小蜂对扶桑绵粉蚧的寄生效能[J]. 高原,黄建,王竹红,温玉琪,钟顺.  武夷科学. 2014(00)

硕士论文
[1]班氏跳小蜂气味结合蛋白OBPs的结合特性分析[D]. 李秋玲.华中农业大学 2018
[2]班氏跳小蜂寄主定位的嗅觉机制[D]. 聂晓培.华中农业大学 2017
[3]温度和寄主对扶桑绵粉蚧个体生长发育的影响[D]. 宋伟.安徽农业大学 2016
[4]不同棉花品种对棉蚜茧蜂的趋性行为反应及机理研究[D]. 伏红伟.扬州大学 2012



本文编号：3699223