柑橘指状青霉中两种新型dsRNA病毒的分离鉴定与特性研究
发布时间：2022-12-18 06:22
指状青霉（Penicillium digitatum）引起的绿霉病是柑橘类水果的主要病害之一,在采后加工、贮藏及运输过程中易引起果实腐烂,从而造成严重的经济损失。化学农药如三唑类药物的长期及大量的施用引发抗药性菌株涌现,这一现象使开发出有效且可持续的真菌生物防治方法更为迫切。真菌病毒是一类可感染真菌并在其体内复制的病毒,研究表明一些真菌病毒的感染可导致其真菌宿主的致病力减弱,具有很好的植物致病真菌防治潜能。柑橘指状青霉中尚未有真菌病毒相关报道,因此筛选并研究指状青霉病毒可为柑橘绿霉病的防治提供新思路,同时为探究真菌病毒的分类进化及真菌病毒与其宿主间的互作机制提供新的参考信息。本文分离鉴定了两株柑橘指状青霉病毒,比较分析了它们对宿主真菌的生理学及形态学影响,探究了其生物防治潜能。本研究主要实验结果如下:1、在柑橘指状青霉菌株HS-RH1中检测到5kb左右dsRNA片段,对该dsRNA进行反转克隆后测序分析表明其全长为5211bp,该序列在GenBank的登录号为KU933932。利用DNAMAN及ORF Finder预测该dsRNA的编码链上有两个开放阅读框（Open Reading F...
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 前言
1.1 柑橘病害及防治
1.1.1 柑橘主要病害
1.1.2 柑橘采后病害的防治策略
1.2 真菌病毒的研究进展
1.2.1 真菌病毒分类
1.2.2 真菌病毒的检测与鉴定方法
1.2.3 真菌病毒与宿主关系
1.2.4 真菌病毒与病毒进化
1.2.5 真菌病毒的传播
1.2.6 真菌病毒与生物防治
1.3 本文研究目的与意义
2 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 菌株与质粒
2.1.2 主要培养基与试剂
2.1.3 本研究所用主要引物
2.1.4 主要仪器设备
2.2 实验方法
2.2.1 指状青霉菌株的培养与保藏
2.2.2 菌株生长速度测定
2.2.3 菌株致病力测定
2.2.4 菌株咪鲜胺EC_(50)测定
2.2.5 指状青霉基因组DNA提取
2.2.6 Trizol法提取指状青霉总RNA
2.2.7 真菌病毒dsRNA提取与纯化
2.2.8 dsRNA全长序列的克隆测序与拼接分析
2.2.9 真菌病毒粒子提取
2.2.10 SDS-PAGE法检测病毒的结构蛋白
2.2.11 病毒粒体的负染透射电镜观察(TEM)
2.2.12 真菌病毒dsRNA的Northern Blot验证
2.2.13 指状青霉原生质体制备与再生
2.2.14 原生质体再生方法
2.2.15 聚乙二醇介导真菌病毒的侵染
2.2.16 高通量测定dsRNA序列
3 实验结果与分析
3.1 指状青霉HS-RH1中dsRNA病毒的分离鉴定与特性分析
3.1.1 菌株HS-RH1中存在特殊dsRNA
3.1.2 菌株HS-RH1中dsRNA的序列测定及分析
3.1.3 菌株HS-RH1中真菌病毒PdV1的病毒粒子观察
3.1.4 菌株HS-RH1中真菌病毒PdV1对宿主真菌的影响
3.2 指状青霉HS-RH2中dsRNA病毒的分离鉴定与特性分析
3.2.1 菌株HS-RH2中存在特殊dsRNA
3.2.2 病毒PdPmV1的dsRNA序列测定及分析
3.2.3 菌株HS-RH2中真菌病毒对宿主真菌的影响
4 讨论
参考文献
攻读硕士期间所发表论文
衷心感谢以下基金资助
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]嘧霉胺对采后柑橘绿霉病的防治效果[J]. 姜丽英,陈国庆,施品忠,徐法三,李红叶. 农药学学报. 2010(02)
[2]The horizontal transmission of Cryphonectria hypovirus 1 （CHV1） is affected by virus strains[J]. DENG QingChao, YE Yun, MIAO Miao, FANG Qin, LI Tao ＆ WANG KeRong Department of Plant Pathology, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095, China. Chinese Science Bulletin. 2009(17)
[3]柑桔青、绿霉病的发病规律及防治措施[J]. 欧阳菊英. 中国南方果树. 2002(06)
[4]果蔬采后病害的生物防治(综述)[J]. 庞学群,张昭其,黄雪梅. 热带亚热带植物学报. 2002(02)
[5]血清学方法和分子生物学方法检测植物病毒研究进展[J]. 袁小环,李青. 热带农业科学. 2001(06)
[6]绿色南方防治柑桔青、绿霉病试验初报[J]. 胡波. 湖北植保. 1999(04)
[7]柑桔贮藏防腐保鲜研究[J]. 周小刚,李美玲,谢金蓉,高菡,周焰西. 西南农业大学学报. 1999(01)
[8]栗疫病菌的营养体亲和性基因和dsRNAs对病毒传播的影响[J]. 王克荣,成桂英,刘怡君,M．G．米格鲁姆. 菌物系统. 1997(01)
[9]柑桔产后病害及药剂防治技术[J]. 叶琪明,李振,包环玉,叶兴祥,李学斌,李国康,刘乃炽,顾宝根. 浙江农业学报. 1996(05)
[10]枯草芽孢杆菌防治柑桔青绿霉病初报[J]. 蒋跃明. 亚热带植物通讯. 1993(02)
博士论文
[1]酵母菌的分离、筛选以及对柑橘保鲜的机理研究[D]. 龙超安.华中农业大学 2005
硕士论文
[1]核盘菌弱毒菌株SX276生物学特性及其携带RNA病毒的研究[D]. 李波.华中农业大学 2016
[2]禾谷镰刀菌低毒病毒FgHV 2-JS 16的全序列分析与生物学功能研究[D]. 章海龙.甘肃农业大学 2014
本文编号：3721526
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 前言
1.1 柑橘病害及防治
1.1.1 柑橘主要病害
1.1.2 柑橘采后病害的防治策略
1.2 真菌病毒的研究进展
1.2.1 真菌病毒分类
1.2.2 真菌病毒的检测与鉴定方法
1.2.3 真菌病毒与宿主关系
1.2.4 真菌病毒与病毒进化
1.2.5 真菌病毒的传播
1.2.6 真菌病毒与生物防治
1.3 本文研究目的与意义
2 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 菌株与质粒
2.1.2 主要培养基与试剂
2.1.3 本研究所用主要引物
2.1.4 主要仪器设备
2.2 实验方法
2.2.1 指状青霉菌株的培养与保藏
2.2.2 菌株生长速度测定
2.2.3 菌株致病力测定
2.2.4 菌株咪鲜胺EC_(50)测定
2.2.5 指状青霉基因组DNA提取
2.2.6 Trizol法提取指状青霉总RNA
2.2.7 真菌病毒dsRNA提取与纯化
2.2.8 dsRNA全长序列的克隆测序与拼接分析
2.2.9 真菌病毒粒子提取
2.2.10 SDS-PAGE法检测病毒的结构蛋白
2.2.11 病毒粒体的负染透射电镜观察(TEM)
2.2.12 真菌病毒dsRNA的Northern Blot验证
2.2.13 指状青霉原生质体制备与再生
2.2.14 原生质体再生方法
2.2.15 聚乙二醇介导真菌病毒的侵染
2.2.16 高通量测定dsRNA序列
3 实验结果与分析
3.1 指状青霉HS-RH1中dsRNA病毒的分离鉴定与特性分析
3.1.1 菌株HS-RH1中存在特殊dsRNA
3.1.2 菌株HS-RH1中dsRNA的序列测定及分析
3.1.3 菌株HS-RH1中真菌病毒PdV1的病毒粒子观察
3.1.4 菌株HS-RH1中真菌病毒PdV1对宿主真菌的影响
3.2 指状青霉HS-RH2中dsRNA病毒的分离鉴定与特性分析
3.2.1 菌株HS-RH2中存在特殊dsRNA
3.2.2 病毒PdPmV1的dsRNA序列测定及分析
3.2.3 菌株HS-RH2中真菌病毒对宿主真菌的影响
4 讨论
参考文献
攻读硕士期间所发表论文
衷心感谢以下基金资助
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]嘧霉胺对采后柑橘绿霉病的防治效果[J]. 姜丽英,陈国庆,施品忠,徐法三,李红叶. 农药学学报. 2010(02)
[2]The horizontal transmission of Cryphonectria hypovirus 1 （CHV1） is affected by virus strains[J]. DENG QingChao, YE Yun, MIAO Miao, FANG Qin, LI Tao ＆ WANG KeRong Department of Plant Pathology, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095, China. Chinese Science Bulletin. 2009(17)
[3]柑桔青、绿霉病的发病规律及防治措施[J]. 欧阳菊英. 中国南方果树. 2002(06)
[4]果蔬采后病害的生物防治(综述)[J]. 庞学群,张昭其,黄雪梅. 热带亚热带植物学报. 2002(02)
[5]血清学方法和分子生物学方法检测植物病毒研究进展[J]. 袁小环,李青. 热带农业科学. 2001(06)
[6]绿色南方防治柑桔青、绿霉病试验初报[J]. 胡波. 湖北植保. 1999(04)
[7]柑桔贮藏防腐保鲜研究[J]. 周小刚,李美玲,谢金蓉,高菡,周焰西. 西南农业大学学报. 1999(01)
[8]栗疫病菌的营养体亲和性基因和dsRNAs对病毒传播的影响[J]. 王克荣,成桂英,刘怡君,M．G．米格鲁姆. 菌物系统. 1997(01)
[9]柑桔产后病害及药剂防治技术[J]. 叶琪明,李振,包环玉,叶兴祥,李学斌,李国康,刘乃炽,顾宝根. 浙江农业学报. 1996(05)
[10]枯草芽孢杆菌防治柑桔青绿霉病初报[J]. 蒋跃明. 亚热带植物通讯. 1993(02)
博士论文
[1]酵母菌的分离、筛选以及对柑橘保鲜的机理研究[D]. 龙超安.华中农业大学 2005
硕士论文
[1]核盘菌弱毒菌株SX276生物学特性及其携带RNA病毒的研究[D]. 李波.华中农业大学 2016
[2]禾谷镰刀菌低毒病毒FgHV 2-JS 16的全序列分析与生物学功能研究[D]. 章海龙.甘肃农业大学 2014
本文编号：3721526
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