二斑叶螨抗药性监测及靶标基因突变频率研究

发布时间：2023-02-08 18:13

　　二斑叶螨Tetranychus urticae Koch是一种世界性的重要农业害螨,其寄主范围广泛,可以危害至少1100种作物,常见的寄主植物包括蔬菜、果树、花卉、棉花、玉米等。二斑叶螨常以成螨和幼若螨群集在植物叶背进行为害,通过口针穿破植物叶片的表皮细胞来刺吸植物汁液,最终致使植物叶片干枯、脱落,从而影响作物的质量和产量。化学药剂是目前防控二斑叶螨的主要措施之一,但生产上常存在施药随意、不科学不合理的选择施药、或单一使用某类化学药剂等问题,由此导致二斑叶螨对多种化学药剂均产生了不同程度的抗药性。靶标抗性是叶螨抗药性最重要的抗性机制之一,近年来已有研究报道叶螨抗性靶标基因的点突变可导致叶螨产生抗药性。在本研究中,首先采用优化的琼脂浸叶法监测了我国二斑叶螨不同田间种群对12种杀虫杀螨剂的抗性水平,明确了不同地区田间二斑叶螨的抗药性现状;针对二斑叶螨的阿维菌素抗性田间种群,建立了二斑叶螨对阿维菌素抗性相关的酶切扩增多态性序列(Cleaved Amplified Polymorphic Sequence,简称CAPS)和环介导等温扩增法(Loop-Mediated Isothermal Am...

【文章页数】：62 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 引言
    1.1 二斑叶螨基本概况
        1.1.1 二斑叶螨基础生物学
        1.1.2 二斑叶螨的发生危害
        1.1.3 二斑叶螨防控措施
    1.2 二斑叶螨抗药性现状及抗性机制
        1.2.1 二斑叶螨抗药性现状
        1.2.2 二斑叶螨抗药性机制
    1.3 二斑叶螨的抗药性监测技术研究
    1.4 二斑叶螨抗药性分子检测技术研究
        1.4.1 等位基因特异性PCR技术(PASA)
        1.4.2 酶切扩增多态性序列标记技术(CAPS)
        1.4.3 TaqMan分子检测技术
        1.4.4 环介导等温扩增技术(LAMP)
        1.4.5 实时荧光定量PCR法
    1.5 本研究的试验内容、目的和意义
        1.5.1 本研究的试验内容
        1.5.2 本研究的目的和意义
第二章 二斑叶螨田间种群的抗药性监测
    2.1 实验材料
        2.1.1 供试叶螨
        2.1.2 实验药剂
        2.1.3 实验仪器
    2.2 实验方法
    2.3 数据分析
    2.4 结果与分析
        2.4.1 二斑叶螨雌成螨对12 种杀虫杀螨剂的敏感基线
        2.4.2 二斑叶螨7 个田间种群对12 种杀虫杀螨剂的抗药性监测
    2.5 讨论
第三章 二斑叶螨抗阿维菌素相关基因的快速检测技术
    3.1 实验材料
        3.1.1 供试叶螨
        3.1.2 试剂和仪器
    3.2 实验方法
        3.2.1 二斑叶螨GluCl3 基因的PCR扩增
        3.2.2 二斑叶螨CAPS标记方法的建立
        3.2.3 二斑叶螨LAMP检测技术的建立
        3.2.4 田间种群的生物测定及突变频率检测
    3.3 数据分析
    3.4 结果与分析
        3.4.1 二斑叶螨CAPS抗性检测技术的建立
        3.4.2 二斑叶螨抗性与敏感种群的LAMP检测方法
        3.4.3 田间种群的生物测定及突变频率检测
    3.5 讨论
第四章 二斑叶螨靶标基因突变频率检测
    4.1 实验材料
        4.1.1 供试叶螨
        4.1.2 试剂和仪器
    4.2 实验方法
        4.2.1 二斑叶螨基因组DNA提取
        4.2.2 二斑叶螨GluCl1 基因片段的克隆及点突变检测
        4.2.3 二斑叶螨GluCl3 基因片段的克隆及点突变检测
        4.2.4 二斑叶螨VGSC、Ace和 Cytb基因片段的克隆及点突变检测
    4.3 数据分析
    4.4 结果与分析
        4.4.1 二斑叶螨靶标基因突变位点的检测
        4.4.2 二斑叶螨抗性点突变与种群抗性的相关性分析
    4.5 讨论
第五章 全文结论
参考文献
致谢
作者简历



本文编号：3738143