小菜蛾双链RNA内切酶对RNAi效率的影响

发布时间：2023-03-19 06:19

　　近年来的研究发现在昆虫体内含有一类ds RNA核酸内切酶(ds RNase),能够通过降解双链RNA(ds RNA)降低昆虫的RNAi效率。本论文利用小菜蛾全基因组数据库,筛选鉴定小菜蛾的ds RNase,通过体内与体外实验研究其对小菜蛾RNAi效率的影响。主要研究结果如下:依据部分鳞翅目昆虫ds RNase蛋白序列在小菜蛾基因组数据库中筛选出4个目的基因(Pxds RNase1、Pxds RNase2、Pxds RNase3和Pxds RNase4)。且Pxds RNase1、Pxds RNase2和Pxds RNase3编码的蛋白含有信号肽和Endounuclease NS域,而基因Pxds RNase4编码的蛋白仅含有Endounuclease NS域。通过进化树分析发现,Pxds RNase1、Pxds RNase2和Pxds RNase3与其他鳞翅目昆虫ds RNase的同源性最高,而Pxds RNase4与双翅目昆虫ds RNase同源性最高。表达模式分析发现,这4个基因都在小菜蛾4龄幼虫期表达量最高,其中Pxds RNase1和Pxds RNase4在各个龄期都有表达,而...

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【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
1 前言
    1.1 非特异性核酸内切酶
    1.2 ds RNase的研究进展
    1.3 本研究的目的和意义
2 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 供试昆虫
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 主要仪器
        2.1.4 供试菌种和质粒
    2.2 实验方法
        2.2.1 小菜蛾血淋巴和中肠蛋白降解 ds RNA 的测定
        2.2.2 基因的筛选
        2.2.3 生物信息学分析
        2.2.4 小菜蛾总 RNA 的提取
        2.2.5 c DNA 的合成
        2.2.6 引物设计
        2.2.7 Pxds RNase 序列的克隆
        2.2.8 RT - q PCR 检测表达量
        2.2.9 ds RNA 的合成
        2.2.10 注射和喂饲 dsRNA
        2.2.11 Pxds RNase的原核表达
        2.2.12 Pxds RNase重组蛋白降解ds RNA能力的测定
        2.2.13 数据统计与分析
3 结果与分析
    3.1 中肠和血淋巴总蛋白对dsRNA的降解
    3.2 小菜蛾ds RNase的序列特征
    3.3 Pxds RNase的时空表达模式
    3.4 注射ds Pxds RNase对 RNAi效率的影响
    3.5 喂饲ds Pxds RNase对 RNAi效率的影响
    3.6 PxdsRNase 的体外功能验证
        3.6.1 Pxds RNase的原核表达
        3.6.2 Pxds RNase降解ds RNA的能力
4 讨论
    4.1 昆虫ds RNase的保守性
    4.2 昆虫ds RNase的表达模式与组织孵育
    4.3 昆虫ds RNase对 RNAi效率的影响
        4.3.1 昆虫ds RNase对体内ds RNA的降解
        4.3.2 昆虫ds RNase对体外ds RNA的降解
5 总结与展望
    5.1 总结
    5.2 展望
参考文献
致谢
附录



本文编号：3764735