美洲斑潜蝇气味结合蛋白鉴定及功能研究
发布时间：2023-03-31 23:36
美洲斑潜蝇是对蔬菜和观赏性植物造成严重危害的一种多食性昆虫,为了研究美洲斑潜蝇的气味结合蛋白的功能,本实验通过对美洲斑潜蝇成虫转录组的测序结果的RACE-PCR扩增验证,获得20个具有完整cDNA编码框的LsatOBPs基因,进一步研究,获得的主要结论如下:1.获得20个cDNA全长序列的气味结合蛋白基因,命名为LsatOBP1-15以及LsatPBPRP2-6,其中9个为Classic OBPs,5个为Minus-C OBPs,4个为Plus-C OBPs,2个为Dimers OBPs。使用荧光定量技术对这20个OBPs基因在美洲斑潜蝇幼虫、蛹以及成虫中的相对表达含量分析,结果发现4个LsatOBPs基因在幼虫阶段表达量很高、2个LsatOBPs在蛹期的表达量很高;5个LsatPBPRPs以及其余9个LsatOBPs在成虫中的表达量很高,这14个LsatOBPs基因在美洲斑潜蝇不同日龄的雌雄成虫中表达量也是存在差异性的,8个LsatOBPs基因在新羽化的雌雄成虫中表达量不存在显著性差异,14个LsatOBPs在羽化三天后的雄成虫中的表达量均显著高于雌成虫中的表达量,5个LsatOBP...
【文章页数】：132 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
abstract
英文缩略表
第一章 引言
1.1 昆虫化学通讯中的信息物质
1.1.1 来自植物的化学信息物质---绿叶挥发性气味
1.1.2 来自昆虫的化学信息物质---信息素类物质
1.1.3 植物化学信息物质和昆虫信息素的关系
1.2 昆虫的外周嗅觉系统
1.2.1 昆虫嗅觉感器种类
1.2.2 昆虫外周嗅觉感受过程
1.3 昆虫气味结合蛋白研究
1.3.1 气味结合蛋白的分类及结构特征
1.3.2 气味结合蛋白生理功能及分布
1.3.3 气味结合蛋白结合特性研究及其应用
1.4 立题依据及研究内容
1.4.1 立题依据
1.4.2 主要研究内容
第二章 美洲斑潜蝇气味结合蛋白基因的筛选
2.1 材料与方法
2.1.1 美洲斑潜蝇样品的收集
2.1.2 主要试剂及仪器设备
2.1.3 美洲斑潜蝇转录组测序及序列拼装
2.1.4 美洲斑潜蝇LsatOBPs基因的鉴定
2.1.5 美洲斑潜蝇LsatOBPs基因的生物信息学分析
2.2 结果与分析
2.2.1 转录组的测序
2.2.2 转录组序列的拼装
2.2.3 转录组序列注释与分析
2.2.4 转录组数据中美洲斑潜蝇LsatOBPs基因的挖掘
2.2.5 美洲斑潜蝇LsatOBPs基因RACE-PCR结果
2.2.6 美洲斑潜蝇LsatOBPs基因生物信息学分析
2.3 讨论
第三章 美洲斑潜蝇气味结合蛋白基因的表达谱分析
3.1 材料与方法
3.1.1 美洲斑潜蝇样品收集
3.1.2 主要试剂及仪器设备
3.1.3 总RNA提取
3.1.4 cDNA反转录第一条链
3.1.5 qPCR引物设计
3.1.6 qPCR反应体系
3.2 结果与分析
3.2.1 荧光定量各个样品总RNA提取
3.2.2 荧光定量实验的内参基因的选择
3.2.3 荧光定量PCR实验中模板浓度的确定
3.2.4 幼虫和蛹中大量表达的LsatOBPs基因
3.2.5 雌雄成虫中大量表达的LsatOBPs基因的表达差异
3.3 讨论
第四章 美洲斑潜蝇气味结合蛋白的结合特性研究
4.1 材料与方法
4.1.1 供试昆虫
4.1.2 主要仪器和试剂
4.1.3 引物设计
4.1.4 总RNA的提取和反转录
4.1.5 原核表达载体的构建
4.1.6 目的蛋白表达和纯化
4.1.7 目的蛋白与 1-NPN的结合常数测定
4.1.8 目的蛋白与特定气味的结合特性分析
4.2 结果与分析
4.2.1 原核表达载体构建
4.2.2 目的蛋白表达形式以及纯化结果
4.2.3 LsatOBP1、LsatOBP13与气味物质的结合特性分析
4.2.4 LsatPBPRPs与气味物质的结合特性分析
4.3 讨论
第五章 美洲斑潜蝇气味结合蛋白的组织免疫荧光共定位
5.1 材料与方法
5.1.1 实验材料与仪器
5.1.3 美洲斑潜蝇气味结合蛋白的免疫抗体制备
5.1.4 美洲斑潜蝇头部扫描电镜的观察
5.1.5 美洲斑潜蝇头部组织冷冻切片
5.1.6 LsatOPBs在美洲斑潜蝇头部的荧光免疫定位
5.2 结果与分析
5.2.1 美洲斑潜蝇七个LsatOBPs的蛋白相互作用预测
5.2.2 美洲斑潜蝇头部口器以及下颚须扫描电镜观察
5.2.3 美洲斑潜蝇七个LsatOBPs在触角嗅觉感器上的免疫定位
5.2.4 美洲斑潜蝇LsatOBPs在口器上的免疫定位
5.3 结论与讨论
第六章 全文结论
6.1 主要结论
6.2 本研究的创新
6.3 本研究的问题与不足
6.4 本研究的展望
参考文献
附录
致谢
作者简历
本文编号：3776013
【文章页数】：132 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
abstract
英文缩略表
第一章 引言
1.1 昆虫化学通讯中的信息物质
1.1.1 来自植物的化学信息物质---绿叶挥发性气味
1.1.2 来自昆虫的化学信息物质---信息素类物质
1.1.3 植物化学信息物质和昆虫信息素的关系
1.2 昆虫的外周嗅觉系统
1.2.1 昆虫嗅觉感器种类
1.2.2 昆虫外周嗅觉感受过程
1.3 昆虫气味结合蛋白研究
1.3.1 气味结合蛋白的分类及结构特征
1.3.2 气味结合蛋白生理功能及分布
1.3.3 气味结合蛋白结合特性研究及其应用
1.4 立题依据及研究内容
1.4.1 立题依据
1.4.2 主要研究内容
第二章 美洲斑潜蝇气味结合蛋白基因的筛选
2.1 材料与方法
2.1.1 美洲斑潜蝇样品的收集
2.1.2 主要试剂及仪器设备
2.1.3 美洲斑潜蝇转录组测序及序列拼装
2.1.4 美洲斑潜蝇LsatOBPs基因的鉴定
2.1.5 美洲斑潜蝇LsatOBPs基因的生物信息学分析
2.2 结果与分析
2.2.1 转录组的测序
2.2.2 转录组序列的拼装
2.2.3 转录组序列注释与分析
2.2.4 转录组数据中美洲斑潜蝇LsatOBPs基因的挖掘
2.2.5 美洲斑潜蝇LsatOBPs基因RACE-PCR结果
2.2.6 美洲斑潜蝇LsatOBPs基因生物信息学分析
2.3 讨论
第三章 美洲斑潜蝇气味结合蛋白基因的表达谱分析
3.1 材料与方法
3.1.1 美洲斑潜蝇样品收集
3.1.2 主要试剂及仪器设备
3.1.3 总RNA提取
3.1.4 cDNA反转录第一条链
3.1.5 qPCR引物设计
3.1.6 qPCR反应体系
3.2 结果与分析
3.2.1 荧光定量各个样品总RNA提取
3.2.2 荧光定量实验的内参基因的选择
3.2.3 荧光定量PCR实验中模板浓度的确定
3.2.4 幼虫和蛹中大量表达的LsatOBPs基因
3.2.5 雌雄成虫中大量表达的LsatOBPs基因的表达差异
3.3 讨论
第四章 美洲斑潜蝇气味结合蛋白的结合特性研究
4.1 材料与方法
4.1.1 供试昆虫
4.1.2 主要仪器和试剂
4.1.3 引物设计
4.1.4 总RNA的提取和反转录
4.1.5 原核表达载体的构建
4.1.6 目的蛋白表达和纯化
4.1.7 目的蛋白与 1-NPN的结合常数测定
4.1.8 目的蛋白与特定气味的结合特性分析
4.2 结果与分析
4.2.1 原核表达载体构建
4.2.2 目的蛋白表达形式以及纯化结果
4.2.3 LsatOBP1、LsatOBP13与气味物质的结合特性分析
4.2.4 LsatPBPRPs与气味物质的结合特性分析
4.3 讨论
第五章 美洲斑潜蝇气味结合蛋白的组织免疫荧光共定位
5.1 材料与方法
5.1.1 实验材料与仪器
5.1.3 美洲斑潜蝇气味结合蛋白的免疫抗体制备
5.1.4 美洲斑潜蝇头部扫描电镜的观察
5.1.5 美洲斑潜蝇头部组织冷冻切片
5.1.6 LsatOPBs在美洲斑潜蝇头部的荧光免疫定位
5.2 结果与分析
5.2.1 美洲斑潜蝇七个LsatOBPs的蛋白相互作用预测
5.2.2 美洲斑潜蝇头部口器以及下颚须扫描电镜观察
5.2.3 美洲斑潜蝇七个LsatOBPs在触角嗅觉感器上的免疫定位
5.2.4 美洲斑潜蝇LsatOBPs在口器上的免疫定位
5.3 结论与讨论
第六章 全文结论
6.1 主要结论
6.2 本研究的创新
6.3 本研究的问题与不足
6.4 本研究的展望
参考文献
附录
致谢
作者简历
本文编号：3776013
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