十字花科黑腐病菌Ⅲ型效应物XopXccR1植物亚细胞定位

发布时间：2023-04-05 10:04

　　【目的】植物病原细菌通过Ⅲ型分泌系统(type Ⅲ secretion system,T3SS)将Ⅲ型效应物(type Ⅲ secreted effectors,T3SEs)分泌转运到宿主细胞的不同位点上,进而行使不同的致病功能。本研究旨在确定Xcc 8004 Ⅲ型效应物中分子量最大的蛋白XopXccR1在植物中的亚细胞定位。【方法】利用生物信息学方法分析XopXccR1的跨膜信息。通过同源重组方法将XopXccR1全长、N端(1–1220aa)和C端(1221–2030 aa)分别克隆到植物表达载体pCAMBIA-2300-35S::EGFP上,利用根癌农杆菌介导的瞬时表达浸染本生烟,通过激光共聚焦显微镜观察亚细胞定位结果。【结果】XopXccR1全长和N端定位在本生烟细胞膜上,而C端定位在细胞质中。【结论】XopXccR1的N端与C端可能分别存在定位信号,N端信号主导全长蛋白的最终定位。

【文章页数】：10 页

【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 材料
        1.1.1 植物材料：
        1.1.2 菌株、质粒和培养条件：
        1.1.3 引物与试剂：
    1.2 生物信息学分析
    1.3 Xcc 8004总DNA提取
    1.4 同源重组
    1.5 重组载体转入根癌农杆菌及鉴定
    1.6 根癌农杆菌介导的瞬时表达转化本生烟
    1.7 转化烟草的激光扫描共聚焦显微镜的观察
2 结果和分析
    2.1 生物信息学分析显示Xop Xcc R1可能是膜蛋白
    2.2 效应物蛋白亚细胞定位表达载体的构建与验证
    2.3 根癌农杆菌的转化和验证
    2.4 Xop Xcc R1全长定位与分段蛋白定位
3 结论和讨论



本文编号：3783218