西方蜜蜂（Apis mellifera）不同级型蜕皮激素早期应答因子ecr和usp的表达及功能分析

发布时间：2023-04-21 19:18

　　蜕皮激素(MH)是蜕皮酮及其类似物的总称,类固醇激素羟基蜕皮酮(20E)是其主要活性形式。蜕皮激素在调控昆虫变态过程中发挥着核心作用,昆虫依靠体内蜕皮激素滴度变化,调控整个变态发育历程。本课题通过对蜕皮激素受体(EcR)与超气门蛋白(USP)基因在西方蜜蜂三型蜂的不同发育历期的表达规律进行研究,同时,我们利用RNA干扰技术进一步的对EcR与USP基因的表达机制进行分析。具体结果如下:为探究蜕皮激素早期应答因子ecr和usp在不同级型的西方蜜蜂体内的时空表达情况及其他相关生物学功能和作用,本研究通过荧光定量PCR技术对不同级型、发育时期的西方蜜蜂中的ecr与usp表达水平进行检测。结果表明,ecr、usp在工蜂小幼虫体内的表达与参照相同,随后稍有增加,但在变态期急剧降至最低水平,而后的蛹期又逐步增加,在成年蜂时期的表达持续维持在较高水平;蜂王体内的变化趋势与工蜂基本类似,所不同的是各阶段的表达量都显著高于工蜂,且在产卵王体内的表达显著高于处女蜂王;雄蜂体内ecr的表达在小幼虫时期稍高,但此后至蛹期都一直处于较低的表达水平,至蛹后期才稍有增加,但羽化后水平较低,老龄雄蜂体内又稍有提高。但u...

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 文献综述
    1 蜕皮激素
        1.1 蜕皮激素的种类及功能
        1.2 蜕皮激素在蜜蜂体内的周期性变化
        1.3 蜕皮激素的合成与代谢
    2 蜕皮激素受体与超气门蛋白
        2.1 EcR与USP的结构特征
        2.2 EcR/USP复合体与蜕皮激素信号的传导
        2.3 EcR与USP在变态发育中的作用
        2.4 EcR与USP的研究前景与意义
    3 荧光定量
        3.1 荧光定量的原理与应用
        3.2 荧光定量方法
    4 基因干扰技术及其在蜜蜂RNAi中的应用
        4.1 基因干扰技术的原理与应用
        4.2 试剂盒合成dsRNA介导RNAi
    5 本论文拟解决的问题
第二章 西方蜜蜂体内EcR与USP基因的表达
    1 材料与方法
        1.1 实验材料
            1.1.1 供体蜜蜂品种及采样标准
            1.1.2 试剂
            1.1.3 主要仪器
        1.2 实验方法
            1.2.1 提取RNA与cDNA反转录
            1.2.2 ecr、usp克隆与定量引物验证
            1.2.3 荧光定量PCR
            1.2.4 数据分析
    2 实验结果与分析
        2.1 ecr、usp定量引物验证
        2.2 定量引物特异性检验
        2.3 建立标准曲线
        2.4 ecr在西方蜜蜂体内各时期的表达
        2.5 ecr在3种级型之间的表达差异
        2.6 usp在西方蜜蜂体内各时期的表达
        2.7 usp在3种级型之间的表达差异
    3 讨论
第三章 利用试剂盒合成dsRNA干扰西方蜜蜂ecr的研究
    1 材料与方法
        1.1 实验材料
            1.1.1 供体蜜蜂品种及采样标准
            1.1.2 试剂
            1.1.3 主要仪器
        1.2 实验方法
            1.2.1 提取RNA与cDNA反转录
            1.2.2 ecri克隆与引物验证
            1.2.3 试剂盒合成dsRNA
            1.2.4 纯化ecr的dsRNA
            1.2.5 试剂盒合成并纯化egfp dsRNA
            1.2.5 ecr dsRNA注射工蜂幼虫干扰试验
    2 实验结果与分析
        2.1 ecr的PCR扩增、质粒重组及基因克隆
        2.2 ecr和egfp dsRNA的合成
        2.3 dsRNA注射干扰结果
    3 讨论
第四章 总结与展望
参考文献
附录
致谢



本文编号：3796099