SRBSDV Pns71和水稻Cyns互作的机制研究
发布时间：2023-04-25 00:51
南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black streaked dwarf virus,SRBSDV)是呼肠孤病毒科Reoviridae斐济病毒属Fijivirus的一个新种,由白背飞虱持久性传播。2009-2014年,该病毒在我国南方稻区和东南亚水稻主产区爆发危害,严重影响水稻生产。此后,我国采用全国性“联防联控”措施,将该病毒田间发生率控制到5%以下。然而,近年来,该病毒的发生率有逐步上升的趋势。南方水稻黑条矮缩病毒的致病性、传播途径、编码的基因功能都有相关报道,但是,该病毒的致病分子机制仍需进一步深入研究,研究结论将有助于分析和揭示该病毒的爆发机制。本研究从湖南省不同地区采集了水稻样本,南方水稻黑条矮缩病毒检测结果表明,2015-2017年,在湖南省有南方水稻黑条矮缩病毒发生危害。前期研究中,利用南方水稻黑条矮缩病毒编码的Pns 71蛋白为诱饵,筛选到与其互作的水稻蛋白Cyns,并采用细胞共定位和双分子荧光互作证实二者真实互作。为进一步深入研究Pns 71蛋白与Cyns蛋白的互作机制,分析Cyns蛋白的保守结构域,显示其含有RNA-binding superfam...
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 前言
1.1 南方水稻黑条矮缩病毒的研究进展
1.1.1 南方水稻黑条矮缩病毒的发生及危害
1.1.2 分类地位和粒体形态
1.1.3 基因组结构和功能
1.1.4 SRBSDV寄主及传播介体
1.1.5 介体的传毒机制
1.1.6 SRBSDV与寄主和传毒介体的互作研究
1.2 Cyns基因的研究进展
1.3 本研究中用到的关键技术体系
1.3.1 酵母双杂交技术
1.3.2 病毒诱导的基因沉默体系
1.3.2.1 病毒诱导的基因沉默简介
1.3.2.2 病毒诱导的基因沉默体系的建立与发展
1.3.2.3 VIGS的作用机制
1.3.2.4 VIGS优缺点
1.3.2.5 烟草脆裂病毒载体
1.3.3 实时荧光定量PCR技术
1.3.3.1 实时荧光定量PCR的简介
1.3.3.2 实时荧光定量PCR的应用
1.3.3.3 实时荧光定量PCR的优缺点
1.4 本章小结
第二章 南方水稻黑条矮缩病毒田间发生情况分子检测
2.1 材料
2.2 方法
2.2.1 水稻总RNA的提取
2.2.2 水稻总cDNA的合成
2.2.3 SRBSDV的PCR扩增
2.2.4 SRBSDV的PCR产物回收
2.3 结果与分析
2.3.1 水稻样品采集
2.3.2 SRBSDV检测
2.4 本章小结
第三章 SRBSDVPns71蛋白与水稻Cyns蛋白互作的关键结构域
3.1 材料
3.2 方法
3.2.1 感受态细胞的制备
3.2.2 Cyns基因结构域分析及结构域克隆PCR引物设计
3.2.3 酵母表达载体的构建
3.2.4 两质粒共转化酵母感受态细胞
3.2.5 蛋白互作的检测
3.3 结果与分析
3.3.1 Cyns基因结构域分析及克隆
3.3.2 Cyns基因结构域PCR扩增
3.3.3 Cyns基因结构域克隆
3.3.4 酵母表达载体的构建
3.3.5 与Pns71互作的Cyns蛋白关键结构域
3.4 本章小结
第四章 水稻Cyns基因的功能
4.1 材料
4.2 方法
4.2.1 感受态细胞的的配置
4.2.2 Cyns基因沉默病毒载体的引物设计
4.2.3 本氏烟总RNA的提取与cDNA的合成
4.2.4 TRV-VIGS系统的构建
4.2.5 TRV-VIGS重组载体转化农杆菌
4.2.6 TRV-VIGS体系侵染水稻和本氏烟
4.3 结果与分析
4.3.1 目的基因的PCR扩增
4.3.2 目的基因克隆
4.3.3 TRV-VIGS系统的构建
4.3.4 沉默Cyns基因水稻表型
4.3.5 沉默Cyns基因本氏烟表型
4.3.6 Cyns在本氏烟的相对表达量
4.4 本章小结
全文结论
参考文献
论文致谢
附录 A-攻读学位期间发表论文
附录 B
本文编号：3800371
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 前言
1.1 南方水稻黑条矮缩病毒的研究进展
1.1.1 南方水稻黑条矮缩病毒的发生及危害
1.1.2 分类地位和粒体形态
1.1.3 基因组结构和功能
1.1.4 SRBSDV寄主及传播介体
1.1.5 介体的传毒机制
1.1.6 SRBSDV与寄主和传毒介体的互作研究
1.2 Cyns基因的研究进展
1.3 本研究中用到的关键技术体系
1.3.1 酵母双杂交技术
1.3.2 病毒诱导的基因沉默体系
1.3.2.1 病毒诱导的基因沉默简介
1.3.2.2 病毒诱导的基因沉默体系的建立与发展
1.3.2.3 VIGS的作用机制
1.3.2.4 VIGS优缺点
1.3.2.5 烟草脆裂病毒载体
1.3.3 实时荧光定量PCR技术
1.3.3.1 实时荧光定量PCR的简介
1.3.3.2 实时荧光定量PCR的应用
1.3.3.3 实时荧光定量PCR的优缺点
1.4 本章小结
第二章 南方水稻黑条矮缩病毒田间发生情况分子检测
2.1 材料
2.2 方法
2.2.1 水稻总RNA的提取
2.2.2 水稻总cDNA的合成
2.2.3 SRBSDV的PCR扩增
2.2.4 SRBSDV的PCR产物回收
2.3 结果与分析
2.3.1 水稻样品采集
2.3.2 SRBSDV检测
2.4 本章小结
第三章 SRBSDVPns71蛋白与水稻Cyns蛋白互作的关键结构域
3.1 材料
3.2 方法
3.2.1 感受态细胞的制备
3.2.2 Cyns基因结构域分析及结构域克隆PCR引物设计
3.2.3 酵母表达载体的构建
3.2.4 两质粒共转化酵母感受态细胞
3.2.5 蛋白互作的检测
3.3 结果与分析
3.3.1 Cyns基因结构域分析及克隆
3.3.2 Cyns基因结构域PCR扩增
3.3.3 Cyns基因结构域克隆
3.3.4 酵母表达载体的构建
3.3.5 与Pns71互作的Cyns蛋白关键结构域
3.4 本章小结
第四章 水稻Cyns基因的功能
4.1 材料
4.2 方法
4.2.1 感受态细胞的的配置
4.2.2 Cyns基因沉默病毒载体的引物设计
4.2.3 本氏烟总RNA的提取与cDNA的合成
4.2.4 TRV-VIGS系统的构建
4.2.5 TRV-VIGS重组载体转化农杆菌
4.2.6 TRV-VIGS体系侵染水稻和本氏烟
4.3 结果与分析
4.3.1 目的基因的PCR扩增
4.3.2 目的基因克隆
4.3.3 TRV-VIGS系统的构建
4.3.4 沉默Cyns基因水稻表型
4.3.5 沉默Cyns基因本氏烟表型
4.3.6 Cyns在本氏烟的相对表达量
4.4 本章小结
全文结论
参考文献
论文致谢
附录 A-攻读学位期间发表论文
附录 B
本文编号：3800371
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