广藿香青枯病菌Tn5转座子插入突变株的遗传稳定性研究

发布时间：2023-05-22 05:58

　　本课题组在前期工作中,开展了 Tn5转座子对广藿香青枯病菌的插入诱变研究。本文以前期获得的广藿香青枯菌菌株PRS-84的16个突变株为材料,分别进行继代培养,每隔5代,观察突变株继代过程中菌落形态的变化,并对突变株Kanr基因进行PCR验证,直至100代;利用Southern blot技术对继代100代的突变株进行鉴定;利用反向PCR技术对继代100代突变株Tn5转座子插入位点的侧翼序列进行扩增及序列测定。在此基础上,对继代100代突变株(PRS-84-6-13和PRS-84-10-69)进行生物学特性研究,综合考察广藿香青枯病菌Tn5转座子插入突变株的遗传稳定性及生物学特性的变化,为筛选遗传稳定的生防菌株奠定基础。1.国内外评述查阅了与本研究相关的国内外文献,从种质资源、栽培育种和病害防治三个方面论述了广藿香的研究现状;从青枯病病原菌的鉴定、青枯菌的致病机制及青枯病的防治方法概述了青枯病的研究现状;从转座子的结构及插入机制、转座子插入位点的鉴定方法、转座子插入的遗传稳定性以及转座子插入诱变的应用方面综述Tn5转座子的相关研究现状。2.继代突变株的分子鉴定以广藿香青枯菌菌株PRS-84...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
引言
第1章 国内外研究现状和评述
    1.1 广藿香的研究进展
        1.1.1 种质资源与鉴定
        1.1.2 栽培和育种
        1.1.3 病害防治
    1.2 植物青枯病的研究进展
        1.2.1 青枯病病原菌的鉴定
        1.2.2 青枯菌的致病机制
        1.2.3 青枯病的防治研究
    1.3 Tn5转座子插入诱变技术研究进展
        1.3.1 Tn5转座子的结构
        1.3.2 Tn5转座子的诱变机制
        1.3.3 转座子插入位点的鉴定方法
    1.4 转座子插入突变株的稳定性研究
        1.4.1 生长特性研究
        1.4.2 生化特性研究
        1.4.3 基因水平研究
    1.5 转座子插入突变技术的应用
        1.5.1 基因功能的分析
        1.5.2 基因表达水平的研究
        1.5.3 无致病力菌株的筛选
第2章 继代突变株的分子鉴定
    2.1 材料和方法
        2.1.1 材料
        2.1.2 方法
    2.2 结果与分析
        2.2.1 继代前后突变株kan^r基因的PCR验证
        2.2.2 探针标记效率的检测
        2.2.3 继代前后突变株的Southern blot分析
    2.3 讨论
第3章 继代前后突变株Tn5转座子插入位点的序列测定及分析
    3.1 材料和方法
        3.1.1 材料
        3.1.2 方法
    3.2 结果与分析
        3.2.1 继代前后突变株Tn5转座子插入位点侧翼序列的获得及序列测定
        3.2.2 继代前后突变株转座子插入位点侧翼序列的比对
    3.3 讨论
第4章 继代突变株的生物学特性研究
    4.1 材料和方法
        4.1.1 材料
        4.1.2 方法
    4.2 结果与分析
        4.2.1 继代前后突变株菌落形态观察
        4.2.2 继代前后突变株生长曲线的绘制
    4.3 讨论
结论与展望
    结论
    展望
参考文献
附录
    附录1 继代前后突变株的Tn5转座子插入位点侧翼序列及比对结果
    附录2 继代前后突变株在TTC平板上的菌落形态
    附录3 英文缩略词表
    附录4 Biospin细菌基因组DNA提取试剂盒说明书
    附录5 Biospin胶回收试剂盒说明书
在校期间发表论文情况
致谢
统计学审核证明



本文编号：3822144