齿兰环斑病毒抗原表位的鉴定及其在抗体纯化中的应用研究

发布时间：2023-07-25 01:45

　　齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV)属于烟草花叶病毒属(Tobamovirus),是导致兰花失去经济价值和观赏价值的主要病毒之一。近年来,由于国际市场对ORSV有较高的检疫要求,兰花种苗生产企业及进出口检疫部门对该病毒检测产品有较大需求。但是,由于ORSV与同属病毒存在明显血清学交叉反应,导致使用多克隆抗体的检测产品准确性较差,无法满足市场需求。本文为提高检测产品的准确性,首先使用ORSV多克隆抗体(ORSV-PAbs)对噬菌体展示7肽库进行淘洗富集;采用高通量测序技术测定噬菌体展示多肽的基因序列,得到4681条序列,其中有58条推导的氨基酸序列与ORSV高度同源,主要分布在1³5_aa、43⁶8_aa、107¹53_aa;同时结合位点保守性,初步表明ORSV的特异抗原表位位于:₂SYTITDPSKLAYLSSAWADPNSLINLCTN₃₀、₅₀AD...

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩写词对照表
第1章 引言
    1.1 齿兰环斑病毒的危害
    1.2 齿兰环斑病毒的防治措施
    1.3 齿兰环斑病毒的病毒检测技术
    1.4 血清学检测产品的存在问题
    1.5 抗原表位应用研究概况
    1.6 选题依据和目的意义
第2章 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 主要仪器与设备
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 病毒毒源和抗体
        2.1.4 试剂配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 噬菌体展示多肽库技术筛选ORSV抗原表位
        2.2.2 Trx-10 肽融合蛋白原核表达载体的构建
        2.2.3 Trx-S-30 肽融合蛋白原核表达载体的构建
        2.2.4 表达载体的测序与诱导表达
        2.2.5 多肽融合蛋白和抗体特异性反应实验
        2.2.6 抗原表位多肽的化学合成
        2.2.7 抗原表位多肽配基亲和介质的制备与抗体纯化
第3章 结果与分析
    3.1 噬菌体展示多肽库技术筛选ORSV抗原表位实验结果
    3.2 抗原表位验证实验结果
        3.2.1 Trx-10 肽、Trx-15 肽原核表达载体的构建结果
        3.2.2 Trx-S-30 肽融合蛋白原核表达载体的构建结果
        3.2.3 多肽融合蛋白的诱导表达实验结果
        3.2.4 多肽融合蛋白与抗体特异性反应
    3.3 抗原表位多肽配基亲和介质的制备与抗体纯化实验结果
        3.3.1 抗原表位多肽的合成结果
        3.3.2 抗原表位多肽配基亲和介质的制备实验结果
        3.3.3 抗原表位抗体的纯化实验结果
        3.3.4 抗原表位抗体的特异性实验结果
第4章 结论与展望
    4.1 结论
    4.2 展望
参考文献
致谢



本文编号：3836926