黏虫几丁质合成酶B cDNA序列的克

发布时间：2023-08-08 16:37

　　黏虫Mythimna separata(Walker)大范围发生时,农作物会大大降低产量有时颗粒无收,是全国性的一种重要农业害虫。目前防治黏虫的方法主要依靠化学防治,不仅为害非靶标生物的安全,污染环境,还增强了黏虫的抗药性。利用分子生物学技术是未来最为有效和环保的生物防治手段之一。几丁质是昆虫围食膜的主要成分,它的合成对昆虫的发育和变态起到至关重要的作用。由于几丁质不存在于植物和脊椎动物中,被认为是理想的环境友好型农药的设计靶标。几丁质合成酶B(CHSBs)负责合成中肠围食膜上的几丁质,确保了昆虫生长发育中围食膜的再形成,当抑制CHSBs基因的表达时,围食膜的结构受到破坏,进而影响虫体的消化与吸收。因此,对合成黏虫中肠围食膜几丁质的几丁质合成酶B进行功能的研究,是发展生物技术的方法防治黏虫的重点。对此,本试验通过高通量测序法得到黏虫的几丁质合成酶B基因的cDNA序列。通过生物信息学分析、荧光定量检测在不同发育阶段和不同组织MsCHSB基因的特异性表达及功能分析,从分子水平上对该基因的表达特性进行研究以及对合成中肠围食膜几丁质这一功能进行分析。得到的结果如下:(1)黏虫几丁质合成酶B基因...

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【学位级别】：硕士

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摘要
英文摘要
1 前言
    1.1 黏虫
    1.2 几丁质
        1.2.1 几丁质简介
        1.2.2 围食膜几丁质
    1.3 几丁质合成途径
    1.4 昆虫几丁质合成酶B研究进展
    1.5 目的与意义
    1.6 技术路线
2 材料与方法
    2.1 试验昆虫
    2.2 试验仪器与试剂
    2.3 MsCHSB基因全长cDNA的克隆
    2.4 核苷酸序列的研究
    2.5 氨基酸序列的研究
        2.5.1 氨基酸序列的结构研究
        2.5.2 氨基酸序列的多重比对
        2.5.3 MsCHSB氨基酸序列系统进化树构建
    2.6 MsCHSB基因时空表达研究
        2.6.1 MsCHSB基因不同发育阶段表达研究
        2.6.2 MsCHSB基因不同组织表达研究
    2.7 饥饿对MsCHSB基因表达影响研究
    2.8 20E蜕皮激素对MsCHSB基因表达影响研究
    2.9 有效激素对MsCHSB基因表达影响研究
    2.10 MsCHSB基因的RNA干扰研究
        2.10.1 体外合成dsRNA
        2.10.2 纯化dsRNA
        2.10.3 注射dsRNA
3 结果与分析
    3.1 MsCHSB基因的克隆与分析
    3.2 氨基酸序列分析
        3.2.1 结构域分析
        3.2.2 信号肽预测
        3.2.3 N-糖基化位点预测
        3.2.4 蛋白质理化性质和跨膜区域
        3.2.5 预测蛋白质的二级结构和三级结构
        3.2.6 氨基酸序列同源性比对
        3.2.7 氨基酸序列系统进化分析
    3.3 MsCHSB基因时空表达结果
        3.3.1 MsCHSB基因在不同发育阶段表达结果
        3.3.2 MsCHSB基因在不同组织表达结果
    3.4 饥饿处理黏虫的结果
        3.4.1 饥饿对MsCHSB基因表达的影响
        3.4.2 饥饿处理后中肠几丁质含量的变化
    3.5 20E蜕皮激素对MsCHSB基因表达的影响
    3.6 有效霉素处理黏虫的结果
        3.6.1 有效霉素对MsCHSB基因表达的影响
        3.6.2 有效霉素诱导后中肠几丁质含量的变化
    3.7 RNA干扰黏虫的结果
        3.7.1 RNA干扰对MsCHSB基因表达的影响
        3.7.2 RNA干扰后黏虫的生长发育
4 讨论
    4.1 MsCHSB基因序列分析
    4.2 MsCHSB基因表达特性分析
        4.2.1 MsCHSB基因不同发育阶段表达分析
        4.2.2 MsCHSB基因不同组织表达分析
    4.3 饥饿处理黏虫的结果分析
    4.4 20E蜕皮激素对MsCHSB基因表达的影响分析
    4.5 有效霉素处理黏虫的结果分析
    4.6 RNA干扰黏虫的结果分析
    4.7 展望
5 结论
致谢
参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文



本文编号：3840101