小菜蛾发育相关免疫基因的筛选及PxCTL5基因功能分析

发布时间：2024-06-05 03:56

　　昆虫免疫反应与其生长发育时期具有相关性,不同的发育阶段昆虫抵抗病原物感染的能力不同。为探讨免疫反应和生长发育的相互关系,本研究对小菜蛾(Plutella xyllostella)不同生长发育阶段的转录组进行测序,利用生物信息学分析了小菜蛾不同发育时期的差异表达相关基因和可变剪接,筛选了小菜蛾免疫与发育的共同调控因子及差异基因,为探讨害虫免疫与发育的相互关系提供了分子网络;C型凝集素(C-type lectins,CTLs)是一类含有特异性糖类识别域(carbohydrate-recognition domain,CRD)的Ca²⁺依赖型模式识别受体,能特异性地识别病原物并且可以启动免疫反应,在昆虫免疫与发育中具有重要作用。运用RT-PCR结合RACE技术克隆了Px CTL5基因的全长序列,以此为基础,在体外进行了高效原核表达,并制备了多克隆抗体;分别利用qRT-PCR技术和Western blot技术检测其在不同细菌诱导后mRN A和蛋白水平上的表达模式;利用PxCTL5蛋白的凝集活性检测了对不同细菌的凝集作用。本研究结果为研究免疫与发育的相互调控作用提供了分子理...

【文章页数】：88 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1昆虫免疫信号通路（Hultmark,2003）

3图1昆虫免疫信号通路（Hultmark,2003）1.1.2丝氨酸蛋白酶级联反应丝氨酸蛋白酶（serineproteinases，SP）是一类蛋白水解酶，以丝氨酸为活性中心，在昆虫免疫防御反应、生长发育过程、消化代谢和胚胎发育中有着重要作用（Ruiz-Perezet....

图2昆虫免疫反应中的蛋白酶级联反应（Kanostetal.,2015）

当特异性位点被剪切或去除时被激活。胞外丝氨酸蛋白酶通路已经在动物演化成对组织损伤和病原物入侵的刺激作出快速反应的机制（Cereniusetal.,2010）丝氨酸蛋白酶含有一个或多个氨基末端剪接域（clipdomain）在调节昆虫的一些免疫反应的细胞外途径中起作用。SP....

图3昆虫免疫和发育通路中的蛋白级联反应（Jangetal.,2006）

和Easter是参与发育和免疫的两种不同蛋白酶级联的末端蛋白酶，但两者作用都是加工Sptzle以激活Toll信号途径。SPE与Easter本质区别是需要不同的激活机制，Toll信号途径被不同触发器激活，可以在非常不同的生理过程中使用。丝氨酸蛋白酶抑制剂Spn....

图4RNA-Seq测序流程图

组织研磨器：天根生化科技有限公司。方法组测序样品收集小菜蛾的生长发育历期，每隔12小时分别收集4龄幼虫期小菜蛾6个样品7个样品和成虫期小菜蛾8个样品。每个样品均在收集后迅速放入液氮罐，取出后迅速转移至超低温冰箱。组测序集到的小菜蛾4龄幼虫期、蛹期和成虫期的各个样品分别混在一起....

本文编号：3989615