苹果茎沟病毒外壳蛋白抗体制备与应用

发布时间：2024-06-08 02:33

　　从苹果寄主上分离得到了苹果茎沟病毒(Apple stem grooving virus,ASGV)中国株系。经基因克隆,测序后发现苹果茎沟病毒中国株系外壳蛋白基因(coat protein,CP)含有714个核苷酸,编码表达由237氨基酸残基组成的27 ku蛋白。通过构建含有ASGV-CP基因的重组表达载体pECASGV-CP,在大肠杆菌BL21 (DE3)中成功表达ASGV-CP蛋白。SDS-PAGE显示其分子质量与预计大小一致。利用纯化的重组蛋白制备多克隆抗体。该抗体可用于Western blot和DAS-ELISA检测技术。基于血清学检测,发现陕西苹果主产区ASGV发生普遍。

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【部分图文】：

图1ASGVCP原核表达分析

将pECASGV-CP转化大肠杆菌BL21后诱导表达,SDS-PAGE分析表明:与阴性对照比较,含有pE-ASGV-CP的BL21经IPTG诱导,在35ku处出现预期的特异性蛋白表达条带。在37℃培养条件下,诱导后2h即出现特异性条带,诱导4h和6h后该条带....

图2ASGVCP过柱纯化

图1ASGVCP原核表达分析2.3抗体制备及检测

图3ASGVCP抗体WesternBlot分析

以稀释2000倍的抗血清作为二抗,提取苹果叶片总蛋白后,采用Westernblot进行蛋白杂交分析。结果显示,在预期大小的位置处,所制备抗体能与植物总蛋白发生特异性反应。抗体对目标蛋白结合的特异性较好,背景清晰,且与阴性对照没有特异性反应(图3)。特异性评价:以脱毒组培苗为....

本文编号：3991321