向日葵锈病抗性相关MicroRNA的挖掘及表达载体的构建

发布时间：2024-07-06 12:18

　　由柄锈菌(Puccinia helianthi Schw.)引起的向日葵锈病是发生在向日葵上重要的真菌病害之一,严重时会影响品质及含油量。MicroRNA(miRNA)是植物体内普遍存在的一种非编码单链小RNA,参与调控植物生长发育及多种逆境胁迫响应。针对向日葵抗病相关miRNA这一研究的空白,本试验构建锈病胁迫下向日葵small RNA文库,通过Solexa高通量测序及生物信息学分析筛选与抗病显著相关的miRNA;利用实时荧光定量(qRT-PCR)技术对10个抗病相关的miRNA进行定量验证,并利用miRanda软件进行靶基因预测;挑选其中的4个抗病相关的miRNA构建miRNA的植物表达载体。这为深入研究向日葵miRNA抗病分子机制及进一步研究向日葵抗病相关miRNA的功能奠定基础。主要研究结果如下:1.用高通量测序技术预测分析了向日葵miRNA,在其全基因组中共发现了 378个miRNA,其中373个是新发现的miRNA,新预测的miRNA中有13个miRNA是对照组(A)、抗病组(B)、感病组(C)三组材料中差异表达的。样品A和样品B之间共有8个差异表达基因,样品B和样品C之间...

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１文库构建原理图??Ｆｉｇ．?１?Ｔｈｅ?ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ｌｉｂｒａｒｙ?ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ??

下向日葵ｓｍａｌｌ?ＲＮＡ文库构建及Ｓｏｌｅｘａ高通量测序??２．４．１文库构建及测序??检测向日葵对照和病害处理叶片的总ＲＮＡ，质量合格后用ｓｍａｌｌ?ＲＮＡ?Ｓａｍｐｌｅ??Ｐｒｅ?Ｋｉｔ来构建其文库，以总ＲＮＡ为起始样品，ｓｍａｌｌ?ＲＮＡ的３’端加上接头，添??加反转录引....

图２向日蔡对照和病害胁迫下ｃｌｅａｎ?ｒｅａｄｓ和ｍｉＲＮＡ的长度分布??

ｗｎ?２０２１８３７?１６５５２５４?１８１５５５２?８８．１７?８７．６２?８７．５３??ｎｃＲＮＡ?５８８８?５０７２?７９８９９?２６?０．２７?３．８６??ｃｌｅａｎ?ｒｅａｄｓ?２２９３１３５?１８９１４４６?２０７３３５９?１００?１００?１００??３．２向日葵抗病相....

图３向日葵已知和新预测ｍｉＲＮＡ各位点的碱基分布图??

?向日葵锈病抗性相关ＭｉｃｒｏＲＮＡ的挖掘及表达载体的构建???３．２．２基于ｍｉＲＮＡ成熟序列的碱基偏好性筛选??因为植物ｍｉＲＮＡ的前体在细胞核中形成，然后运输到细胞质中，由ＤＣＬ１??酶酶切处理后，形成成熟的ｍｉＲＮＡｓ，这种酶切位点的特异性使得ｍｉＲＮＡ序列??首位对Ｕ具....

图５向日葵叶片的总ＲＮＡ凝胶电泳??Ｆｉ．５?Ｔｏｔａｌ?ＲＮＡｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｈｏｒｅｓｉｓ?ｏｆ?ｓｕｎｆｌｏｗｅｒ?ｌｅａｖｅｓ??

蒙古农业大学硕士学位论文???接上表９???３１?Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ?ｅｘｃｉｓｉｏｎ?ｒｅｐａｉｒ?０．２８４２６?ｋｏ０３４２０??３２?ｍＲＮＡ?ｓｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅ?ｐａｔｈｗａｙ?０．２９６０５?ｋｏ０３０１５??３３?Ｅｎｄｏｃｙｔｏｓｉｓ?０．４０７４６?ｋｏ....

本文编号：4002542