杨树炭疽病菌对杀菌剂的抗药性研究

发布时间：2020-04-19 20:11

【摘要】：杨树炭疽病是杨树上的重要病害之一,近年来在我国局部地区发生严重,造成严重的经济损失。本研究以杨树上的胶孢炭疽菌和隐秘刺盘孢为靶标菌,研究了其对4种常用杀菌剂的敏感性,评估了杨树炭疽病菌对多菌灵的抗药性风险,并初步探究了胶孢炭疽菌对多菌灵的抗性分子机制。该研究结果为林业上科学用药防治炭疽病、制定合理的抗药性策略提供科学指导,同时为建立抗性菌株的分子检测技术奠定一定基础。主要研究结果如下:1.采用菌丝生长速率法测定了分离自杨树炭疽病病叶的59株胶孢炭疽菌和4株隐秘刺盘孢对多菌灵、苯醚甲环唑、三唑酮和戊唑醇4种杀菌剂的敏感性。结果表明:胶孢炭疽菌对多菌灵的敏感性频率分布呈连续单峰曲线,表明尚未出现敏感性下降的群体;而对苯醚甲环唑和戊唑醇的敏感性频率分布呈现双峰,表明已出现敏感性下降的群体;不同寄主来源的胶孢炭疽菌对同种杀菌剂的敏感性之间无显著差异(P0.05)。2.室内经过药剂诱导获得5个胶孢炭疽菌抗性菌株和4个隐秘刺盘孢抗性菌株,ECs0值介于6.5852～39.0251μg/mL,抗性水平介于115～573之间,突变频率高,抗性水平高,表明杨树炭疽病菌对多菌灵的抗药性容易产生。在无药的PDA培养基上连续继代培养十代后,5个胶孢炭疽菌抗性菌株对多菌灵的敏感性相对稳定,表明其抗药性可以稳定遗传,而4个隐秘刺盘孢抗性菌株中有3个抗性菌株抗性水平有下降趋势。3.通过对抗性菌株的部分生物学性状进行研究,发现胶孢炭疽菌抗性菌株的菌丝生长速率与亲本相比明显减弱,而产孢能力、孢子萌发率及致病力方面与亲本菌株没有明显差异:而隐秘刺盘孢抗性菌株与亲本菌株相比,其主要生物学性状发生不同程度变化。4.交互抗药性研究结果表明:多菌灵与嘧菌酯、苯醚甲环唑、三唑酮、戊唑醇、乙霉威、百菌清等6种不同作用机制杀菌剂之间无交互抗药性,与苯甲酰胺类杀菌剂苯酰菌胺之间存在明显的正交互抗药性。5.对抗性菌株的β3-tubulin1和β-tubulin2基因进行全序列扩增,并与敏感菌株进行比对分析。氨基酸序列比对结果表明,其中4个抗性菌株(Y3-6-D1、Y3-6-D2、BH9-1-D4、YP1-7-D1)的β-tubulin1和β-tubulin2氨基酸序列与其亲本的均一致,一个抗性菌株(2C5-3-D1)的β-tubulin2的第198位氨基酸由谷氨酸(E)变为赖氨酸(K)。采用实时荧光定量PCR(qPCR)测定β-tubulin1和β-tubulin2在抗性菌株中的相对表达量。表达量分析表明:4个抗性菌株(Y3-6-D1、Y3-6-D2、BH9-1-D4、YP1-7-D1)的β-tubulin1基因相对表达量显著增加,而抗性菌株2C5-3-D1的β-tubulin1和β-tubulin2基因的相对表达量与亲本相比均没有显著性差异。
【图文】：

值和最大ＥＣ５Ｑ值分别相差３．５、１６．４、２７．７和１２．６倍，平均￡（：５0值分别为（０．０６６４±０．０１３１）、逡逑（０．３７４１±０．２５４８）、（０．６８１２±０．４４２１）和（１９．８２±６．２００）吨／ｍＬ。胶孢炭疽菌对多菌灵的敏感逡逑性频率分布呈连续单峰曲线（图２－１Ａ），可将该平均ＥＣ５0值（０．０６６４±０．０１３１）邋ｇｇ／ｍＬ逡逑作为胶孢炭疽菌对多菌灵的敏感基线；而对苯醚甲环唑和戊唑醇的敏感性频率分布则逡逑均出现了不同程度的分化，呈双峰曲线（图２－１Ｂ和图２－１Ｃ），表明己出现敏感性下逡逑降的群体。逡逑１３逡逑

２．２．３胶孢炭疽菌对４种杀菌剂敏感性的相关性逡逑分析结果发现，５９株胶孢炭疽菌对４种杀菌剂的敏感性表现出一定的相关性。逡逑其中，苯醚甲环唑和戊唑醇之间存在显著正相关性（ｐ＝０．６６５５，ＪＰ＜０．０００１）（图２－３邋Ａ），逡逑戊唑醇与三唑酮之间存在一定的相关性（＞＝０．４８９６，ＰＣ０．０００１）（图２－３Ｂ），，但苯醚逡逑甲环唑与三唑酮和多菌灵之间均无显著相关性（Ｐ＞０．０１）（图２－３Ｃ和图２－３Ｄ）。逡逑１６逡逑
【学位授予单位】：北京林业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S763.7

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本文编号：2633691