白花泡桐幼林根瘤内生细菌的分离及鉴定

发布时间：2020-06-03 11:36

【摘要】：为了探究非豆科植物泡桐与微生物共生固氮体系,对泡桐根瘤内生细菌的分离培养条件及其系统发育地位进行初步研究。对从广西钦州市和南宁市2处地点采集的白花泡桐(Paulownia fortunei(Seem.)Hemsl)根瘤上分离、纯化获得的根瘤内生细菌菌株,进行了传统生理生化特性、生长适应性、回接试验,并对16SrDNA全序列以及固氮nifA基因片段序列进行了测定和系统发育分析。研究结果如下:1.经分离纯化共获得21株泡桐根瘤内生细菌菌株,从菌体的形态特征来看,除菌株PG-7外,其余菌株均为杆状,革兰氏染色均为阴性,所有菌株均无芽孢,有鞭毛,33%的菌株有荚膜,这些菌株的形态与根瘤菌有许多相似性。从生理生化特征的鉴定来看,不同菌株之间存在着较明显的差异。3-酮基乳糖试验均呈阴性,10%的菌株可以水解淀粉,90%的菌株都能利用柠檬酸盐,33%的菌株能还原硝酸盐,大部分菌株表现牛肉膏蛋白胨的阳性反应,B.T.B反应试验中95%的菌株均产酸。多数供试菌株能不同程度地利用KNO3和(NH4)2HPO4两种氮源,有95%的菌株能利用硝酸盐,有90%的菌株能利用铵盐,绝大部分菌株都能在含有碳源的培养基上生长良好。2.泡桐根瘤内生细菌的最适生长温度为30℃左右,多数菌株不能耐高温和低温。耐酸碱的范围较宽,有48%的菌株能在pH值为4.0～9.0的条件下生长,具有较强的耐碱性,耐酸能力相对较差。耐盐能力较好,有81%的菌株能在NaC1为2.0%的浓度下生长。大部分供试菌株对Sm和Cm抗性最强,而对Tc和Gm无抗性,不同菌株对抗菌素的抗性有较大差异。3.回接结瘤试验中,接种9株根瘤内生菌株的试管幼苗均未结瘤,但在盆栽试验中对泡桐幼苗的生长有明显的促进作用。不同的根瘤内生细菌对植株的促生效应有明显差异,接种菌株PG-9的幼苗株高和地径生长量为最高。4.通过16SrDNA全序列分析,可将21株供试菌株分为6个细菌属,分别为根瘤菌属(Rhizobium)、土壤杆菌属(Agrobacterium)、草螺菌属(Herbaspirillum)、伯克氏菌属(Burkholderia)、壳聚糖酶产生菌属(Mitsuaria)和鞘脂菌属(Sphingobium)。其中根瘤菌处于优势地位,有67%的菌株都是根瘤菌,说明了泡桐根瘤内生细菌具有丰富地遗传多样性。5.对供试菌株的nifA基因片段进行了扩增和测序,通过比对分析得出,菌株PG-7与伯克氏菌属的nifA基因有97%的相似性,而其余菌株与根瘤菌属的nifA基因均有普遍相似性,与参比菌株相似性均在95%至以上,最高达到99%。
【图文】：

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兰氏（ＰＧ－７）邋；邋Ｂ：鞭毛（ＰＧ－４）邋；邋Ｃ：荚膜（ＰＧ－８）邋；邋Ｄ：芽孢（ＰＧ－３）逡逑Ａ：邋Ｇｒａｍ邋（ＰＧ－７）；邋Ｂ：邋Ｆｌａｇｅｌｌａ邋（ＰＧ－４）；邋Ｃ：邋Ｃａｐｓｕｌｅ邋（ＰＧ－８）；邋Ｄ：邋Ｓｐｏｒｅ邋（ＰＧ－３）逡逑图３分离菌株形态学特征逡逑Ｆｉｇ．邋３邋Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ邋ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ邋ｏｆ邋ｉｓｏｌａｔｅｄ邋ｓｔｒａｉｎｓ逡逑
【学位授予单位】：广西大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S792.43

【参考文献】

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1 丁文s，

本文编号：2694765