白桦miR156及其靶基因BpSPL9的功能研究

发布时间：2020-06-14 04:16

【摘要】：SPL是植物特异性的转录因子家族,通过调节各种生理生化过程在植物生长和发育中起到重要作用。本实验通过构建白桦BpSPL9基因的植物抑制表达载体和miR156的过表达载体,进行白桦的遗传转化,对获得的转基因株系进行表型观测,并验证白桦miR156和BpSPL9基因的功能及调控关系。主要研究包括:1.应用Gateway的方法构建白桦BpSPL9的植物抑制表达载体,采用根瘤农杆菌介导的合子胚法进行白桦的遗传转化,通过PCR和定量PCR的方法检测转基因植株,结果表明,白桦BpSPL9基因已经成功整合到了植物的基因组上。通过对BpSPL9抑制表达转基因白桦株系进行表型观测,发现转基因株系苗高比对照植株的苗高低30.34%,地径低6.24%,单株叶片数量少于26.03%,第七八片叶叶面积分别低于42.87%和50.91%,叶片长宽比低于27.21%和27.99%,叶间距主要分布在8-14 mm之间,而非转基因对照植株的节间距分布在10-14 mm之间。对转基因植株进行激素含量测定,结果表明:GA3、IAA及6-BA含量较非转基因植株含量降低。2.应用Gateway技术构建白桦miR156的植物过表达载体,采用根瘤农杆菌介导的合子胚法进行白桦的遗传转化,通过PCR和定量PCR的方法鉴定转基因植株,结果表明,白桦miR156已经成功整合到了植物的基因组上。并且转基因植株的miR556表达量高于非转基因对照植株。通过对转miR156白桦株系进行表型观察,发现其苗高比对照植株的苗高39.88%,地径高18.41%,单株叶片数量多于46.74%,第七、八片叶叶面积分别低于58.92%和75.60%,叶片长宽比高于4.47%和4.53%,叶间距主要位于6-8 mm,而对照植株的节间距主要位于10-14 mm,节间距比对照植株短。对转基因植株进行激素含量测定,结果表明:GA3、IAA、BR及6-BA含量较非转基因植株含量增加,叶绿素含量及花青素含量也都有明显增加。白桦12条SPL基因家族中7条有microRNA156识别位点,通过对miR156过表达转基因株系的定量分析,选取表达量较高的2个号的cDNA为模板,对7条SPL基因进行定量分析,定量PCR结果表明:BpSPL5、BpSPL8、BpSPL9、BpSPL11、BpSPL12基因表达量有所下降,表明这5条基因受miR156的调控,miR156和BpSPL9基因呈现负调控的关系。 【学位授予单位】：东北林业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S792.153

【图文】：

以多年生的白桦的叶片ｃＤＮＡ为模板，根据白桦转录组数据获得的办５／１９全长，逡逑设计特异引物，进行ＰＣＲ扩增，扩增产物于０．８％琼脂糖凝胶中进行电泳检测，结果显逡逑示在１１７６ｂｐ处获得特异条带，，与目标大小一致（见图２－１）。逡逑Ｔｕｎｖ邋Ｉ逡逑５＊０１＾邋＿壚（、：５．、：：：＿＿：丨．４：呡赛—Ｊｊ逡逑２３＜？ｒ逦；逡逑图２－１基因ＰＣＲ产物电泳图谱逡逑Ｍ．邋ＭａｒｋｅｒＤＬ２０００；邋１．水对照；２．邋尸基因逡逑－１０－逡逑

ＴＯＰＯ反应液转入大肠杆菌中，涂在筛选（卡那霉素）平板中，３７邋°Ｃ过夜，随机挑逡逑取单克隆进行菌液ＰＣＲ检测。结果显示，挑取的６个单克隆中３个检测为阳性，目的逡逑基因办兑Ｚ９抑制表达基因已经整合到了邋ＴＯＰＯ载体上，如图２－２。逡逑■＾＾＾；缝＿：栜‘戮後象囊灥１＿：黎？

本文编号：2712261