柳杉赤枯病病原菌的分离鉴定及室内药剂筛选

发布时间：2020-11-06 13:20

　　 柳杉是我国高山速生用材树种,目前在四川作为重要的经济用材树种被大量种植。柳杉赤枯病发生比较严重,造成巨大的经济损失。本文主要以四川雅安(天全、芦山)地区的柳杉为研究对象,观察柳杉赤枯病病原菌在针叶上的形态学特征,按照组织分离法分离纯化得到柳杉赤枯病病原菌的纯培养菌株。通过病原菌的形态学和分子生物学鉴定,确定为污斑拟盘多毛孢(Pestalotiopsis foedans)。在此基础上进一步研究柳杉赤枯病病原菌的生物学特性,探讨该致病菌适宜生长和产孢条件;在室内药效试验中选择相应的供试农药,寻找对该病原菌抑制效果较好的化学农药。研究结果如下:1采集四川省雅安市天全县、芦山县的柳杉病叶样本带回室内进行分离鉴定,根据形态学特性、致病力测定并通过ITS序列和β-微管蛋白基因序列构建系统发育树的分析,确定柳杉赤枯病是由污斑拟盘多毛孢(Pestalotiopsis foedans)引起。2对病原菌进行生物学特性进行相关研究,结果表明病原菌的菌丝和分生孢子在pH4-10的范围内均能生长良好和萌发,对生长环境酸碱度的适应性较强。生长和萌发的最适温度为25℃。分生孢子的萌发受湿度影响较大,在湿度90%时大量萌发,萌发率90%。菌丝在连续或间断光照条件下均能生长良好。因此高温多湿的环境有助于病原菌的菌丝生长和分生孢子的传播和萌发,从而使病害的病情加重。3选用5种杀菌剂对供试菌进行室内毒力测定,结果表明70%甲基硫酸灵对拟盘多毛孢菌菌丝生长的抑制效果稳定且抑制率较高,EC50为6.133 μg/ml,其次是50%多菌灵。75%百菌清和15%三唑酮可湿性粉剂的抑菌效果最差,EC50分别为262.426μg/ml,793.51 μg/ml。
【学位单位】：四川农业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2017
【中图分类】：S763.7
【部分图文】：

．２?Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ?ｏｆ?ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ?ｂａｃｔｅｒｉａ?ｉｓｏｌａｔｅｄ?ｆｒｏｍ?ｌｅａｖｅｓ?ｏｆ?Ｃｒｙｐｔｏｍｅ早期形态Ｂ菌落轮状扩展Ｃ分生孢子堆Ｄ、Ｅ分生孢子Ｆ分生孢ｌｙ?ａｐｐｅａｒａｎｃｅ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｃｏｌｏｎｙ?Ｂ?Ｃｏｎｃｅｎｔｒｉｃ?ｅｘｐａｎｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｃｏｌｏｎｙ?Ｃ?Ｃｏｎｉｐｉｌｅ?Ｄ、Ｅ?Ｃｏｎｉｄｉｏｓｐｏｒｅ?Ｆ?Ｃｏｎｉｄｉｕｍ?ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ??菌的分子生物学鉴定??的柳杉赤枯病病原菌利用通用引物ＩＴＳ－４和ＩＴＳ－５进行ＰＣＲ扩增获琼脂糖凝胶电泳，得到清晰的条带，对比可知，ＰＣＲ产物片段之间。（图?３）??

图４?（３－微管蛋白ＰＣＲ扩增产物琼ｇａｒｏｓｅ?ｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｏｆ?ｂｅｔａ－ｔｕｂｌ列测序后，得到ＩＴＳ－ｒＤＮＡ的基因序列长度为５４１ｂｐ，柳杉赤枯病Ｔ

３?ＩＴＳ－ＰＣＲ扩增产物琼脂糖凝胶电泳ｒｏｓｅ?ｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｏｆ?ＩＴＳ－ＰＣＲ?ａｍｐ病原菌利用引物Ｂｔ２ａ、Ｂｔ２ｂ扩增ｐ－微电泳，得到清晰的条带，对比可知，图４?（３－微管蛋白ＰＣＲ扩增产物琼脂
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本文编号：2873189