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舞毒蛾Methuselah-like受体激动剂性肽功能分析

发布时间:2020-12-11 07:29
  舞毒蛾(Lymantria dispar)是一种世界性的害虫,对森林造成严重的危害。目前对舞毒蛾的防治仍以化学防治为主,而其导致的“3R”问题亦不容忽视。因此,寻找新的分子作用靶标来创制新型杀虫剂进行无公害防治具有重要意义。研究报道Mth受体对一系列外界胁迫因素(饥饿、高温、氧化)的耐受性显著增强。昆虫Mth受体的结构功能、信号转导通路的研究,为我们揭示生物衰老机制提供了新的途径,而其内源性配体研究将为我们研究Mth受体的功能和新杀虫剂靶标的创制打开新思路。本研究以亚洲型舞毒蛾为对象,克隆Mthl受体内源性配体性肽(Sex Peptide,命名为LdSP)基因,并对LdSP基因进行生物信息学分析,利用RNAi技术和转基因果蝇技术分析LdSP基因对昆虫生长发育、新陈代谢及抗逆性的影响。具体研究结果如下:1、成功从舞毒蛾转录组文库中筛选1个Methuselah-like受体内源性配体基因序列,并克隆LdSP基因全长。LdSP基因的阅读框(ORF)长度为1263 bp,编码420个氨基酸,蛋白质分子量为48.79 kDa,pI为8.79,为碱性蛋白,不含信号肽,LdSP蛋白具有G蛋白偶联受体... 

【文章来源】:东北林业大学黑龙江省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】:68 页

【学位级别】:硕士

【部分图文】:

舞毒蛾Methuselah-like受体激动剂性肽功能分析


图1-1黑腹果蝇Mth受体胞外结构域171??-171??

舞毒蛾,龄期


2.3.1?RNA提取和消化??提取的舞毒蛾RNA电泳条带整齐,28S?rRNA条带亮度约为18S?rRNA的1.5 ̄2.0倍??(图2-1),说明RNA完整性好,可用于反转录,进行实时荧光定量PCR。??:?f??图2-1舞毒蛾各龄期总RNA??Fig.?2-1?Total?RNA?of?Lynmntria?dispar?oi?different?developmental?stages??注:1:.?卵;2:?1龄;3:?2龄;4:?3龄;5:?4龄;6:?5龄;7:?6龄;8、9:蛹;10:雄成虫;11:雌成虫??2.3.2?L必/^基因克隆??RT-PCR检测U斯基因大小与预期结果一致(图2-2和2-3),可以进行如下试验。??,〇〇〇b,^'??-12-??

蛋白信号


?Tnr?V*9l?Iro?1>t??Affirm?Uoi??图2-6?LdSP蛋白的氨基酸组成??Fig.2-6?Amino?acid?composition?of?LdSP?protein??用SignalP4.1软件进行信号肽分析,预测结果显示,LWP基因不含信号肽序列??(图2-7)。跨膜结构分析结果显示,LdSP蛋白拥有7个跨膜螺旋结构(图2-8),??跨膜情况见表2-2。LdSP蛋白的保守结构域分析结果显示,LdSP蛋白存在G蛋白??偶联受体家族成员基本的7-跨膜受体结构(7tm-l),属于GPCRs?B家族(图2-??9)〇??SignalP-4.1?prediction?(euk?networks):?LdSP?? ̄ ̄1? ̄C-score?'?二??-?S-sco「e?????Y-score??0.8?-?-??0.6?-?-??co?0-4?-?-??0.2?-?'?-??〇.〇??W^QD?KEA'VDYFGD?FNAT?R?KDV?PNDVTDD?I?K?I?NY?PY?FDNQTQY?PCi?YS?N?FS?S?ED?FCQS?NH?SH?FY?LNVTC?EF?F??0?10?20?30?40?50?60?70??Position??图2-7?LdSP蛋白信号肽分析??Fig.?2-7?S

【参考文献】:
期刊论文
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[3]转飞蝗CYP408B1和CYP409A1基因果蝇品系对杀虫剂的敏感性[J]. 高翠娥,张建琴,张徐波,张建珍,封云涛,吴海花,马恩波.  中国农业科学. 2015(06)
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[6]果蝇长寿基因methuselah的研究进展[J]. 张正红,张儒.  昆虫学报. 2012(12)
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[9]动物转基因新技术研究进展[J]. 孙振红,苗向阳,朱瑞良.  遗传. 2010(06)
[10]舞毒蛾研究进展[J]. 侯雅芹,南楠,李镇宇.  河北林果研究. 2009(04)

博士论文
[1]花绒寄甲转录组测序及重要功能基因分析[D]. 张伟.西北农林科技大学 2014



本文编号:2910130

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