基于荧光原位杂交的沙地云杉及近缘种亲缘关系研究
发布时间：2020-12-29 19:42
云杉属树种是中国和世界植物资源中重要的森林树种,有很高的生态价值和经济价值。关于该属树种的核型模式、系统分类和起源进化关系等的研究具有重大的生物学与林学意义。本研究以7种云杉天然林的种子为材料,在常规染色体制片法的基础上,对云杉中期染色体制备技术进行优化并建立了完善的制片体系;采用同源序列法克隆了18S rDNA和25S rDNA基因片段,经序列测定分析后确定其为双色荧光原位杂交的探针,对7种云杉的中期染色体进行基因定位。为各云杉同源染色体识别、近缘种亲缘关系分析和系统发育研究提供了有效的方法。主要研究结果如下:1.优化去壁低渗火焰干燥制片法,筛选出最理想的预处理条件是0.1%秋水仙素（含1%二甲基亚枫）在23℃转速为115 rpm的摇床里暗处理6.5 h;酶解条件是根尖在（2%纤维素酶+1%果胶酶溶液）酶混合溶液中37℃解离70-75 min,得到了分散程度高、形态完好的中期染色体制片,提高了制片效率和质量。2.以沙地云杉基因组DNA为模板,通过PCR法扩增了18S rDNA和25S rDNA基因片段,测序后确定它们的序列分别为1472bp和364bp。经BLAST分析两个克隆序列与...
【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区
【文章页数】：52 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
FISH原理示意图
（Ribosome），是细胞内一种核糖核蛋白颗粒，主要由 RNA（rRNA，其惟一功能是按照 mRNA 的指令将氨基酸合成蛋白质多肽链，所内蛋白质合成的分子机器[67]。原核生物和真核生物的核糖体均由大、[68]。S 为大分子物质在超速离心沉降中的一个物理学单位，可间接反[69]。真核细胞核糖体的沉降系数为 80S，大亚基为 60S，约有 49 种蛋NA（28S rRNA、5S rRNA 和 5.8S rRNA)[70]，存在于大亚基中；小亚约 33 种蛋白质和一种 18S rRNA[71]。核糖体被誉为“细胞的蛋白质工码核糖体 RNA 的基因，其测定序列常用来鉴别物种和鉴定物种同源PCR 技术和荧光染色技术相结合准确定位基因位置。编码 18S、5.8S为 1 个转录单元，以中度重复的串联多拷贝形式存在于染色体 DNA个位点上（如图 2）。每个重复单元从 5ˊ到 3ˊ依次包含一个基因间ic spacer，IGS）、一个 18S rDNA 编码区、一个内转录间隔区（in spacer，ITS）和一个 28S rDNA 编码区，其中 ITS 区分为 ITS1 和 IT一个 5.8S rDNA 编码区[72]。
11:10-11:50 和 13:00-13:40 切取的根尖经染色体制片，统计单位视野面积内处于中期的染色体数量（每个视野观察 10-15 个细胞），经多次对比试验，发现：上午11:10-11:50 时的根尖制片可观察到约 16-18%的中期分裂相，分散效果最理想。另两个取材时间也观察到了中期染色体，但获得中期分裂相的概率仅为 3-4%。因此，上午 11:10-11:50 为最适宜的云杉根尖中期染色体制片取材时间。3.1.2 预处理条件的筛选试验中做了 3 种不同的根尖预处理，观察和统计每种预处理 100 张制片的染色体分裂情况和数目，从尼康显微镜拍摄的结果图 3A 可以得知：0.1%秋水仙素（含 1%二甲基亚枫）对根尖处理 6.5 h 的时候效果最佳，得到的中期染色体分散程度高、染色体形态清晰，如图 3B；冰水预处理得到的中期染色体分散性较差，如图 4；饱和对二氯苯在处理根尖的过程中大多数染色体出现凝缩现象，如图 3C。因此，在云杉根尖染色体制片时，用 0.1%秋水仙素（含 1%二甲基亚枫）处理 6.5 h 能够获得优异的制片效果。
【参考文献】：
期刊论文
[1]荧光原位杂交技术在检测染色体异常来源成分中的应用价值[J]. 韦小妮,康涵,王文丹,吕康模. 中国优生与遗传杂志. 2018(02)
[2]基因组原位杂交技术及其在园艺植物基因组研究中的应用[J]. 王燕,陈清,陈涛,张静,汤浩茹,王小蓉. 西北植物学报. 2017(10)
[3]云杉3个种103个家系175个无性系选[J]. 赵新华,王军辉,祁松,田开春,胡华,刘军,黄成名,祁万宜. 绿色科技. 2016(01)
[4]基于荧光原位杂交技术的紫薇属植物核型分析[J]. 王晶,杨冰洁,潘隆应,蔡明,丁晓六,潘会堂,张启翔. 西北植物学报. 2016(01)
[5]荧光原位杂交技术在植物多倍体起源与进化研究中的应用[J]. 付文炎,刘义飞,黄宏文. 热带亚热带植物学报. 2014(03)
[6]荧光原位杂交技术的研究进展[J]. 何世斌,柴连琴,谭珺隽,沈尧,周萍,马云峰,李立家. 植物科学学报. 2014(02)
[7]荧光原位杂交技术(FISH)及其在植物分子细胞遗传学中的应用与展望[J]. 林秀琴,毛钧,陆鑫,刘新龙,马丽,蔡青. 甘蔗糖业. 2012(01)
[8]小麦、黑麦FISH技术特异序列探针的研究进展[J]. 汪慧,郭长虹,郭东林. 生物技术通报. 2011(08)
[9]植物染色体分带及其荧光原位杂交技术研究进展[J]. 高猛,安玉麟,孙瑞芬. 生物技术通报. 2010(10)
[10]核糖体的结构和功能研究——2009年诺贝尔化学奖解读[J]. 唐雅婷,刘克文. 中国校外教育. 2010(16)
硕士论文
[1]石蒜与忽地笑荧光原位杂交研究[D]. 程晓蕾.南京林业大学 2006
[2]我国几种木本植物植原体的分子检测与鉴定[D]. 李永.中国林业科学研究院 2004
本文编号：2946193
【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区
【文章页数】：52 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
FISH原理示意图
（Ribosome），是细胞内一种核糖核蛋白颗粒，主要由 RNA（rRNA，其惟一功能是按照 mRNA 的指令将氨基酸合成蛋白质多肽链，所内蛋白质合成的分子机器[67]。原核生物和真核生物的核糖体均由大、[68]。S 为大分子物质在超速离心沉降中的一个物理学单位，可间接反[69]。真核细胞核糖体的沉降系数为 80S，大亚基为 60S，约有 49 种蛋NA（28S rRNA、5S rRNA 和 5.8S rRNA)[70]，存在于大亚基中；小亚约 33 种蛋白质和一种 18S rRNA[71]。核糖体被誉为“细胞的蛋白质工码核糖体 RNA 的基因，其测定序列常用来鉴别物种和鉴定物种同源PCR 技术和荧光染色技术相结合准确定位基因位置。编码 18S、5.8S为 1 个转录单元，以中度重复的串联多拷贝形式存在于染色体 DNA个位点上（如图 2）。每个重复单元从 5ˊ到 3ˊ依次包含一个基因间ic spacer，IGS）、一个 18S rDNA 编码区、一个内转录间隔区（in spacer，ITS）和一个 28S rDNA 编码区，其中 ITS 区分为 ITS1 和 IT一个 5.8S rDNA 编码区[72]。
11:10-11:50 和 13:00-13:40 切取的根尖经染色体制片，统计单位视野面积内处于中期的染色体数量（每个视野观察 10-15 个细胞），经多次对比试验，发现：上午11:10-11:50 时的根尖制片可观察到约 16-18%的中期分裂相，分散效果最理想。另两个取材时间也观察到了中期染色体，但获得中期分裂相的概率仅为 3-4%。因此，上午 11:10-11:50 为最适宜的云杉根尖中期染色体制片取材时间。3.1.2 预处理条件的筛选试验中做了 3 种不同的根尖预处理，观察和统计每种预处理 100 张制片的染色体分裂情况和数目，从尼康显微镜拍摄的结果图 3A 可以得知：0.1%秋水仙素（含 1%二甲基亚枫）对根尖处理 6.5 h 的时候效果最佳，得到的中期染色体分散程度高、染色体形态清晰，如图 3B；冰水预处理得到的中期染色体分散性较差，如图 4；饱和对二氯苯在处理根尖的过程中大多数染色体出现凝缩现象，如图 3C。因此，在云杉根尖染色体制片时，用 0.1%秋水仙素（含 1%二甲基亚枫）处理 6.5 h 能够获得优异的制片效果。
【参考文献】：
期刊论文
[1]荧光原位杂交技术在检测染色体异常来源成分中的应用价值[J]. 韦小妮,康涵,王文丹,吕康模. 中国优生与遗传杂志. 2018(02)
[2]基因组原位杂交技术及其在园艺植物基因组研究中的应用[J]. 王燕,陈清,陈涛,张静,汤浩茹,王小蓉. 西北植物学报. 2017(10)
[3]云杉3个种103个家系175个无性系选[J]. 赵新华,王军辉,祁松,田开春,胡华,刘军,黄成名,祁万宜. 绿色科技. 2016(01)
[4]基于荧光原位杂交技术的紫薇属植物核型分析[J]. 王晶,杨冰洁,潘隆应,蔡明,丁晓六,潘会堂,张启翔. 西北植物学报. 2016(01)
[5]荧光原位杂交技术在植物多倍体起源与进化研究中的应用[J]. 付文炎,刘义飞,黄宏文. 热带亚热带植物学报. 2014(03)
[6]荧光原位杂交技术的研究进展[J]. 何世斌,柴连琴,谭珺隽,沈尧,周萍,马云峰,李立家. 植物科学学报. 2014(02)
[7]荧光原位杂交技术(FISH)及其在植物分子细胞遗传学中的应用与展望[J]. 林秀琴,毛钧,陆鑫,刘新龙,马丽,蔡青. 甘蔗糖业. 2012(01)
[8]小麦、黑麦FISH技术特异序列探针的研究进展[J]. 汪慧,郭长虹,郭东林. 生物技术通报. 2011(08)
[9]植物染色体分带及其荧光原位杂交技术研究进展[J]. 高猛,安玉麟,孙瑞芬. 生物技术通报. 2010(10)
[10]核糖体的结构和功能研究——2009年诺贝尔化学奖解读[J]. 唐雅婷,刘克文. 中国校外教育. 2010(16)
硕士论文
[1]石蒜与忽地笑荧光原位杂交研究[D]. 程晓蕾.南京林业大学 2006
[2]我国几种木本植物植原体的分子检测与鉴定[D]. 李永.中国林业科学研究院 2004
本文编号：2946193
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