川硬皮肿腿蜂气味结合蛋白OBP1、OBP2的结合特性与行为验证
发布时间：2021-01-30 05:38
自然界中,寄生蜂主要利用嗅觉来进行信息交流,并在寄主定位、寻找配偶、产卵定位、躲避有害物质中发挥着重要作用。寄生蜂的嗅觉系统中,存在多种嗅觉蛋白,其中气味结合蛋白（OBPs）与气味分子的结合为寄生蜂和外界气味物质发生反应的第一步。为了研究川硬皮肿腿蜂（SclerodermasichuanensisXiao）的嗅觉机制,明确其气味结合蛋白与寄主及环境挥发性气味物质的结合能力。本文利用已知的川硬皮肿腿蜂气味结合蛋白OBP1和OBP2基因序列,设计特异性引物,重组质粒表达并纯化OBP1、OBP2蛋白,随后对纯化后的蛋白进行结合特性研究,同时利用“Y”型嗅觉仪测定雌成蜂对挥发性气味物质的趋性行为反应,分析两种气味结合蛋白的结合特性与肿腿蜂识别气味的关系。主要研究成果如下:（1）利用NCBI上登录的川硬皮肿腿蜂OBP1、OBP2基因序列,设计特性行引物,成功表达并纯化了 OBP1、OBP2蛋白,分别获得大小约为18kDa和20kDa的高纯度蛋白。（2）利用荧光竞争结合试验,解析了川硬皮肿腿蜂OBP1、OBP2与18种挥发性气味配体的结合能力。研究结果显示,OBP1、OBP2均主要与萜烯类化合物具...
【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２昆虫嗅觉识别过程１５９１??Ｆｉｇ．２?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｖｉｅｗ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｏｄｏｒａｎｔ?ｐｅｒｃｅｐｔｉｏｎ?ｐｒｏｃｅｓｓ?ｉｎ?ｉｎｓｅｃｔｓ１５９１??
５．１．３?〇ＢＰ１和ＯＢＰ２与ｐ￡Ｔ－２８ａ（＋）载体构建重组质粒??将ＰＣＲ扩增好的ＯＢＰｌ、０ＢＰ２进行胶回收，连接到ｐＭＤ？１９－Ｔ?Ｖ转化感受态细胞￡．?ｃｏ／／ＤＨ５ｏｔ，后经蓝白斑筛选并提质粒测序验证ａ的质粒０ＢＰ１、ＯＢＰ２和ｐＥＴ－２８ａ（＋）用限制性内切酶Ｓａｃ?Ｉ、Ｘｈｏ?Ｉ害Ｉ，随后构建重组质粒，将重组质粒０ＢＰ１／?ｐＥＴ?－２８ａ（＋）与０ＢＰ２／?ｐＥ３０??
化到ＤＨ５ａ感受态细胞，经蓝白斑筛选后，挑取３－５个生长较好的阳性单克隆ＬＢ液体培养基（含Ａｍｐ）、３７?°Ｃ、２２０?ｒｍｉｎ—１培养过夜，再进行重组质粒的落ＰＣＲ鉴定，测序验证完成后，提取重组质粒。结果表明重组质粒序列正确，??构建表达载体成功。??
【参考文献】：
期刊论文
[1]小菜蛾触角结合蛋白PxylOBP31的鉴定与结合特性分析[J]. 覃江梅,蔡立君,郑丽双,程小娟,尤民生. 昆虫学报. 2016(08)
[2]小菜蛾气味结合蛋白OBP2基因的克隆、表达谱及其结合特性分析[J]. 程小娟,蔡立君,郑丽双,覃江梅,黄宇萍,尤民生. 昆虫学报. 2016(04)
[3]烟粉虱MED隐种气味结合蛋白OBP8的克隆、原核表达及与植物挥发物的结合特性[J]. 王然,张晓曼,李峰奇,吴帆,李红亮,罗晨. 植物保护学报. 2016(01)
[4]绿盲蝽气味结合蛋白AlucOBP8的结合特性分析[J]. 朱晓强,丁玉骁,刘航玮,周延乐,张永军,郭予元. 中国生物防治学报. 2015(06)
[5]白蜡吉丁肿腿蜂学习行为的研究[J]. 唐艳龙,魏可,王小艺,杨忠岐,姜静,吕军. 环境昆虫学报. 2015(05)
[6]巨桉云斑天牛生物防治技术研究[J]. 姜勇,贾廷彬,何兴炳,侯晓杰,张楠,王勇. 四川林业科技. 2015(04)
[7]川硬皮肿腿蜂的复壮技术研究[J]. 胡霞,尹鹏,周祖基,王智勇,廖金花,宗华. 环境昆虫学报. 2014(05)
[8]幼期经历和成蜂学习行为对淡足侧沟茧蜂寄主选择性的影响[J]. 季香云,包杨滨,万年峰,蒋杰贤,刘君. 上海农业学报. 2013(06)
[9]昆虫嗅觉相关蛋白及嗅觉识别机理研究概述[J]. 胡颖颖,徐书法,Abebe J.Wubie,李薇,国占宝,周婷. 基因组学与应用生物学. 2013(05)
[10]粉蝶盘绒茧蜂中国和荷兰种群学习行为及EAG反应的比较[J]. 王国红,刘勇,戈峰,吴开拓. 生态学报. 2012(02)
博士论文
[1]麦长管蚜气味结合蛋白的结合特性及组织定位[D]. 钟涛.中国农业科学院 2012
[2]斑痣悬茧蜂寄主搜寻行为生态学的研究[D]. 杨德松.南京农业大学 2009
[3]挥发物在调节稻飞虱及其天敌种内种间关系中的作用[D]. 刘芳.浙江大学 2001
硕士论文
[1]烟蚜茧蜂羽化前学习对成虫寄主选择行为的影响[D]. 张晨阳.西北农林科技大学 2016
[2]花绒寄甲对松褐天牛搜寻选择行为的研究[D]. 于丽颖.山东农业大学 2014
[3]铜绿丽金龟气味结合蛋白功能分析[D]. 赵莹.西北农林科技大学 2014
[4]中红侧沟茧蜂气味结合蛋白Mmed OBP8的气味结合特征及行为反应验证[D]. 张康.华中农业大学 2011
[5]寄主植物对甜菜夜蛾产卵选择性的影响[D]. 窦高兴.广西大学 2008
[6]川硬皮肿腿蜂驯化效果检测及触角感器的初步观察[D]. 张犀.四川农业大学 2007
[7]川硬皮肿腿蜂学习行为及松节油定向培育研究[D]. 谢正华.四川农业大学 2005
本文编号：3008350
【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２昆虫嗅觉识别过程１５９１??Ｆｉｇ．２?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｖｉｅｗ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｏｄｏｒａｎｔ?ｐｅｒｃｅｐｔｉｏｎ?ｐｒｏｃｅｓｓ?ｉｎ?ｉｎｓｅｃｔｓ１５９１??
５．１．３?〇ＢＰ１和ＯＢＰ２与ｐ￡Ｔ－２８ａ（＋）载体构建重组质粒??将ＰＣＲ扩增好的ＯＢＰｌ、０ＢＰ２进行胶回收，连接到ｐＭＤ？１９－Ｔ?Ｖ转化感受态细胞￡．?ｃｏ／／ＤＨ５ｏｔ，后经蓝白斑筛选并提质粒测序验证ａ的质粒０ＢＰ１、ＯＢＰ２和ｐＥＴ－２８ａ（＋）用限制性内切酶Ｓａｃ?Ｉ、Ｘｈｏ?Ｉ害Ｉ，随后构建重组质粒，将重组质粒０ＢＰ１／?ｐＥＴ?－２８ａ（＋）与０ＢＰ２／?ｐＥ３０??
化到ＤＨ５ａ感受态细胞，经蓝白斑筛选后，挑取３－５个生长较好的阳性单克隆ＬＢ液体培养基（含Ａｍｐ）、３７?°Ｃ、２２０?ｒｍｉｎ—１培养过夜，再进行重组质粒的落ＰＣＲ鉴定，测序验证完成后，提取重组质粒。结果表明重组质粒序列正确，??构建表达载体成功。??
【参考文献】：
期刊论文
[1]小菜蛾触角结合蛋白PxylOBP31的鉴定与结合特性分析[J]. 覃江梅,蔡立君,郑丽双,程小娟,尤民生. 昆虫学报. 2016(08)
[2]小菜蛾气味结合蛋白OBP2基因的克隆、表达谱及其结合特性分析[J]. 程小娟,蔡立君,郑丽双,覃江梅,黄宇萍,尤民生. 昆虫学报. 2016(04)
[3]烟粉虱MED隐种气味结合蛋白OBP8的克隆、原核表达及与植物挥发物的结合特性[J]. 王然,张晓曼,李峰奇,吴帆,李红亮,罗晨. 植物保护学报. 2016(01)
[4]绿盲蝽气味结合蛋白AlucOBP8的结合特性分析[J]. 朱晓强,丁玉骁,刘航玮,周延乐,张永军,郭予元. 中国生物防治学报. 2015(06)
[5]白蜡吉丁肿腿蜂学习行为的研究[J]. 唐艳龙,魏可,王小艺,杨忠岐,姜静,吕军. 环境昆虫学报. 2015(05)
[6]巨桉云斑天牛生物防治技术研究[J]. 姜勇,贾廷彬,何兴炳,侯晓杰,张楠,王勇. 四川林业科技. 2015(04)
[7]川硬皮肿腿蜂的复壮技术研究[J]. 胡霞,尹鹏,周祖基,王智勇,廖金花,宗华. 环境昆虫学报. 2014(05)
[8]幼期经历和成蜂学习行为对淡足侧沟茧蜂寄主选择性的影响[J]. 季香云,包杨滨,万年峰,蒋杰贤,刘君. 上海农业学报. 2013(06)
[9]昆虫嗅觉相关蛋白及嗅觉识别机理研究概述[J]. 胡颖颖,徐书法,Abebe J.Wubie,李薇,国占宝,周婷. 基因组学与应用生物学. 2013(05)
[10]粉蝶盘绒茧蜂中国和荷兰种群学习行为及EAG反应的比较[J]. 王国红,刘勇,戈峰,吴开拓. 生态学报. 2012(02)
博士论文
[1]麦长管蚜气味结合蛋白的结合特性及组织定位[D]. 钟涛.中国农业科学院 2012
[2]斑痣悬茧蜂寄主搜寻行为生态学的研究[D]. 杨德松.南京农业大学 2009
[3]挥发物在调节稻飞虱及其天敌种内种间关系中的作用[D]. 刘芳.浙江大学 2001
硕士论文
[1]烟蚜茧蜂羽化前学习对成虫寄主选择行为的影响[D]. 张晨阳.西北农林科技大学 2016
[2]花绒寄甲对松褐天牛搜寻选择行为的研究[D]. 于丽颖.山东农业大学 2014
[3]铜绿丽金龟气味结合蛋白功能分析[D]. 赵莹.西北农林科技大学 2014
[4]中红侧沟茧蜂气味结合蛋白Mmed OBP8的气味结合特征及行为反应验证[D]. 张康.华中农业大学 2011
[5]寄主植物对甜菜夜蛾产卵选择性的影响[D]. 窦高兴.广西大学 2008
[6]川硬皮肿腿蜂驯化效果检测及触角感器的初步观察[D]. 张犀.四川农业大学 2007
[7]川硬皮肿腿蜂学习行为及松节油定向培育研究[D]. 谢正华.四川农业大学 2005
本文编号：3008350
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