蒙古沙冬青两个抗逆相关锌指蛋白基因的克隆及功能分析

发布时间：2021-02-09 15:09

　　蒙古沙冬青（Ammopiptanthus mongolicus）是我国西北荒漠区特有的常绿旱生阔叶灌木,具有很强的抗逆特性。本论文从该植物克隆到两个抗逆相关锌指蛋白基因AmZFP3和AmZFP4,然后通过表达特性和转基因拟南芥抗逆性等表型变化对其功能进行了鉴定。主要研究结果如下:（1）利用RT-PCR方法扩增到AmZFP3编码区cDNA（1101bp）,预测其编码蛋白含366个氨基酸残基,分子量为40.76KD,等电点为9.09,含有zf-RINGH2结构域及两个跨膜区,可能定位于细胞质膜。（2）利用半定量RT-PCR方法进行了表达分析,结果表明:在蒙古沙冬青幼苗中,AmZFP3的转录水平在低温、干旱和盐胁迫处理2 h～48 h期间有不同程度的上调,而在高温处理期间基本不变;在野外自然条件下生长的蒙古沙冬青嫩叶中,该基因在寒冷的秋冬季节表达量高于温热的春夏季节,尤其在12月份转录水平最高;在春季野外生长植株不同器官中,该基因在嫩叶和嫩根中转录水平最高,而在嫩枝、花朵和未成熟果荚中转录水平较低。（3）将AmZFP3编码区cDNA片段连接到植物超表达载体pCAMBIA3300上并转化野生型... 

【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区

【文章页数】：47 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略语表
1 引言
    1.1 锌指蛋白的结构与类型
        1.1.1 RING型锌指蛋白研究进展
        1.1.2 A20/AN1型锌指蛋白SAPs研究进展
    1.2 沙冬青抗逆性研究进展
    1.3 本研究的目的及意义
2 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 野外取样
        2.1.3 实验所用试剂、酶及其他材料
        2.1.4 所用引物序列
    2.2 实验方法
        2.2.1 溶液及试剂的配制
        2.2.2 植物材料胁迫处理
        2.2.3 总RNA提取及cDNA合成
        2.2.4 基因克隆和测序
        2.2.5 蛋白基本特征分析
        2.2.6 基因表达分析
        2.2.7 植物表达载体构建
        2.2.8 拟南芥的转化
        2.2.9 转基因拟南芥的筛选与繁殖
        2.2.10 转基因拟南芥的抗逆性鉴定
        2.2.11 数据统计分析
3 结果与分析
    3.1 AmZFP3基因的克隆与功能鉴定
        3.1.1 总RNA的提取与检测
        3.1.2 AmZFP3编码区cDNA的克隆
        3.1.3 AmZFP3蛋白结构预测
        3.1.4 AmZFP3在蒙古沙冬青中的表达分析
        3.1.5 AmZFP3转基因拟南芥的获得及其抗逆性鉴定
    3.2 AmZFP4基因的克隆和表达分析
        3.2.1 AmZFP4编码区cDNA的克隆
        3.2.2 AmZFP4蛋白结构预测
        3.2.3 AmZFP4在蒙古沙冬青中的表达分析
4 讨论
    4.1 AmZFP3可能编码RING-H2型锌指蛋白
    4.2 AmZFP3可能在蒙古沙冬青抵抗逆境中起重要作用
    4.3 AmZFP4可能编码A20/AN1胁迫相关蛋白
5 结论
致谢
参考文献
作者简介



本文编号：3025826