越南槐的毛状根诱导技术研究

发布时间：2021-03-09 03:38

　　越南槐（Sophora tonkinensis Gagnep.）的干燥根及根茎,是常用中药,其药材名为山豆根,山豆根其药用有效成分苦参碱（Matrime）及氧化苦参碱（Oxymatrime）具有显著的抗癌和抗真菌效果。医药市场对越南槐原料需求量极大,急需寻找新的替代资源或新的途径来生产越南槐药用原料。药用植物毛状根具有生长速度快、易于大规模培养、生产稳定、合成次生代谢物含量高等特点。本研究采用共培养法研究发根农杆菌感染越南槐无菌苗诱导产生毛状根,并在此基础上从各种不同培养条件（基本培养基、生长调节剂）对毛状根生长的影响方面进行研究,探索定向培养越南槐细胞及器官代替越南槐原药材的新途径。主要结果如下：（1）农杆菌R1601、A4和15834都能诱导出越南槐毛状根,但最适合诱导越南槐毛状根的菌种为发根农杆菌R1601,其诱导率最高（66.67%）,而且毛状根较粗壮、生长迅速；子叶与茎段相比更适合作为诱导毛状根的外植体,子叶的诱导率高达66.67%,而茎段的诱导率次之（43.33%）,叶片作为外植体未能诱导出毛状根。（2）越南槐子叶在预培养后再进行诱导,诱导率高于用子叶直接浸染菌株进行诱导,... 

【文章来源】：广西大学广西壮族自治区 211工程院校

【文章页数】：48 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 绪论
    1.1 药用植物毛状根的研究进展
        1.1.1 药用植物毛状根的特点
        1.1.2 药用植物毛状根形成的影响因素
        1.1.3 药用植物毛状根的转化方法
        1.1.4 药用植物毛状根的鉴定
        1.1.5 药用植物毛状根在植物次生代谢产物研究中的应用
    1.2 研究意义与目的
    1.3 研究技术路线
第二章 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 供试材料
        2.1.2 主要仪器与设备
        2.1.3 主要药品与试剂
    2.2 方法
        2.2.1 菌株保藏与活化
        2.2.2 发根农杆菌的生长曲线测定
        2.2.3 发根农杆菌筛选
        2.2.4 外植体筛选
        2.2.5 预培养时间筛选
        2.2.6 菌液浓度筛选
        2.2.7 侵染时间筛选
        2.2.8 共培养时间筛选
        2.2.9 乙酰丁香酮（AS）浓度筛选
        2.2.10 头孢噻肟钠（Cef）浓度对毛状根抑菌效果筛选
        2.2.11 越南槐毛状根的PCR鉴定
        2.2.12 越南槐毛状根生长培养基优化
        2.2.13 越南槐毛状根生物碱含量测定
第三章 结果与分析
    3.1 发根农杆菌的活化与筛选
        3.1.1 绘制农杆菌生长曲线
        3.1.2 菌株的筛选
    3.2 越南槐毛状根诱导与鉴定
        3.2.1 不同外植体诱导毛状根的诱导率比较
        3.2.2 不同预培养时间对越南槐毛状根诱导率的影响
        3.2.3 不同菌液浓度对越南槐毛状根诱导率的影响
        3.2.4 不同侵染时间对越南槐毛状根诱导率的影响
        3.2.5 不同共培养时间对越南槐毛状根诱导率的影响
        3.2.6 不同AS浓度对越南槐毛状根诱导率的影响
        3.2.7 不同头孢噻肟钠（Cef）浓度对毛状根抑菌效果的影响
        3.2.8 越南槐毛状根的PCR鉴定
    3.3 越南槐毛状根生长培养基优化
        3.3.1 培养基对越南槐毛状根生长的影响
        3.3.2 不同生长调节剂处理对越南槐毛状根生长的影响
    3.4 越南槐毛状根生物碱含量的测定
第四章 结论与讨论
    4.1 结论
    4.2 讨论
        4.2.1 越南槐毛状根的诱导
        4.2.2 越南槐毛状根的培养
        4.2.3 创新性
        4.2.4 研究展望
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间论文发表情况


【参考文献】：
期刊论文
[1]资源植物毛状根培育及应用研究进展[J]. 胡琼,任国平.  北方园艺. 2020(06)



本文编号：3072179