基于基因组荧光原位杂交的沙地云杉及近缘种亲缘关系

发布时间：2021-03-16 01:49

　　利用基因组原位杂交（Genomic in situ hybridization,GISH）技术,以白杄基因组DNA作探针DNA红皮云杉基因组DNA作封阻DNA和红皮云杉基因组DNA作探针DNA白杆基因组DNA作封阻DNA,对沙地云杉中期染色体进行基因组原位杂交鉴定,分析三种云杉基因组间的亲缘关系,并进行核型分析,同时对试验技术进行了优化研究。结果表明:1.上午9:00～10:00取的根尖出现中期染色体细胞数目比下午2:00～3:00的多,可能与细胞分裂旺盛有关;根尖用0.1%秋水仙素和1%二甲基亚枫混合液置于摇床23℃、115rpm的暗条件下处理6.5h,分裂中期细胞较多,形态良好;用现配2%纤维素酶和1%果胶酶混合液在37℃条件下进行酶解70min,染色体分散效果较好;探针DNA及封阻DNA制备中高压灭菌3min时的基因组DNA片段长度集中在200～500bp之间,是云杉属植物原位杂交所需的探针DNA和封阻DNA最佳片段大小。2.白杆基因组DNA在沙地云杉14条染色体上有杂交信号,分别为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、13、14、19和20号染色体;红皮云杉基因组DNA在沙... 

【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区

【文章页数】：37 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
1 引言
    1.1 云杉属概述
    1.2 沙地云杉概述
        1.2.1 沙地云杉形态学特征
    1.3 沙地云杉近缘种概述
        1.3.1 红皮云杉
        1.3.2 白杆
    1.4 基因组原位杂交技术
    1.5 基因组原位杂交（GISH）技术的研究进展
    1.6 研究目的与意义
    1.7 技术路线
2 试验材料和方法
    2.1 试验材料
    2.2 主要仪器设备
    2.3 主要试剂
    2.4 试验方法
        2.4.1 染色体制片
        2.4.2 核型分析
        2.4.3 探针DNA及封阻DNA的制备
        2.4.4 基因组原位杂交
3 结果与分析
    3.1 染色体制片取材时间的筛选
    3.2 染色体制片技术优化
        3.2.1 预处理条件的筛选
        3.2.2 酶解条件筛选
    3.3 基因组DNA提取效果
    3.4 基因组DNA剪切效果
        3.4.1 高压灭菌剪切法
        3.4.2 超声波剪切法
    3.5 三种云杉的染色体核型分析
    3.6 基因组原位杂交结果
        3.6.1 白杄基因组DNA在沙地云杉中期染色体上的原位杂交结果
        3.6.2 红皮云杉基因组DNA在沙地云杉中期染色体上的原位杂交结果
4 讨论
    4.1 取材时间与细胞分裂时相关系
    4.2 预处理液对染色体制片的影响
    4.3 影响基因组原位杂交结果的因素
    4.4 三种云杉的亲缘关系
5 结论
致谢
参考文献
作者简介



本文编号：3085193