河北杨再生体系及遗传转化体系建立研究

发布时间：2021-03-28 17:01

　　本研究以河北杨（Populus hopeiensis Hu et Chow）1年生嫩枝为外植体,通过对不同培养阶段最佳培养基与生长调节剂浓度的筛选,建立了河北杨的高效再生体系。并在此基础上,以河北杨无菌苗叶片为受体材料,利用农杆菌介导法转化WOX基因,对影响转化效率的主要因素进行了研究,为河北杨提供高效、安全、规模化遗传转化改良平台,也为其他杨树遗传转化培育新品种及相关基因功能研究提供理论和技术参考。主要研究结果如下:1.河北杨再生体系的建立:最佳消毒方法为先用75%酒精消毒30 s,再用0.1%升汞消毒12 min,消毒效果最好,污染率最低为10%,死亡率为13.33%;茎段诱导腋芽最佳培养基为1/2MS+0.5 mg·L-1 6-BA+0.05 mg·L-1 NAA,腋芽萌发时间为7d,诱导率为95%;最佳生根培养基为1/2MS+0.3 mg·L-1 IBA+0.05mg·L-1 NAA,生根率达100%;炼苗移栽基质配比为草炭土:蛭石:珍珠岩=6:3:1（v/v/v）,成活率达93.7%。2.河北杨遗传转化受体体系的建立:叶片诱导不定芽最佳培养基为MS+0.3 mg·L-1 TD... 

【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区

【文章页数】：49 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２?５号培养基中腋芽的诱导情况??Ｆｉｇ．２?ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ａｘｉｌｌａｒｙ?ｂｕｄｓ?ｉｎ?ｍｅｄｉｕｍ?５??

图４无菌苗移栽??Ｆｉｇ．４?ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｉｎｇ?ｏｆ?ｓｔｅｒｉｌｅ?ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ??

?内蒙古农业大学硕士学位论文?２３??图５?８号培养基中不定芽的诱导情况??Ｆｉｇ．５?ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ?ｂｕｄｓ?ｉｎ?ｍｅｄｉｕｍ?８??注：Ａ．培养１５?ｄ的不定芽；Ｂ．培养２５?ｄ的不定芽；Ｃ．培养３５?ｄ的不定芽??Ａ．?ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ?ｂｕｄｓ?ｃｕｌｔｕｒｅｄ?ｆｏｒ?１５?ｄａｙｓ；?Ｂ．?ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ?ｂｕｄｓ?ｃｕｌｔｕｒｅｄ?ｆｏｒ?２５?ｄａｙｓ；?Ｃ．?ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ?ｂｕｄｓ?ｃｕｌｔｕｒｅｄ??ｆｏｒ?３５?ｄａｙｓ??３．２．２不同浓度潮霉素对叶片诱导不定芽的影响??不同浓度潮霉素处理试验结果如表６所示，叶片对潮霉素非常敏感，随着潮霉素??的浓度的升高叶片分化率降低，平均不定芽数变少；潮霉素浓度１．０?ｍ＾Ｉ／１时，分化??率达到７０％，叶色浅绿，不定芽较少，长势较好（图５．Ａ）；潮霉素浓度为２．０?ｍｇ＊！；１??时，叶色黄绿，不定芽少，长势弱（图５．Ｂ）；当潮霉素浓度为Ｓ．Ｏｍｇ＊！；１时，在边缘??可见分化芽（图５．Ｃ）；当潮霉素浓度增加至５．０?ｍｐＬ—１时，没有芽点且大部分叶片都??褐化死亡（图５．Ｄ）。因此，避免潮霉素浓度过低产生大量的假阳性苗或者因其浓度??过高导致损伤转化细胞，本实验选择潮霉素浓度为３．０?。??表６不同浓度潮霉素对叶片诱导不定芽的影响??Ｔａｂｌｅ．?６?Ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｆ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ?ｏｆ?ｈｙｇｒｏｍｙｃｉｎ?ｏｎ?ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ?ｂｕｄｓ?ｉｎｄｕｃｅｄ?ｂｙ?ｌｅａｖｅｓ??１霉素／ｍｇ＊！；１?外植体数／个?分化率／％?不定芽生

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本文编号：3105924