转NF-YB8基因杨树对干旱胁迫的生理机制
发布时间：2021-04-08 04:56
干旱是植物生长发育的主要环境限制因子之一,提高干旱条件下杨树的生产力是杨树性状改良的重要目标。因此,深入研究杨树中调控抗逆生长发育的生理与分子机理有着重要的理论意义和实践价值。本研究以杨树无性系717-1B4（雌株,Populustremula x P.alba,以下简称717）和过表达转基因株系（以下简称NF-YB8）及空载体转化植株（以下简称K-717）为材料,通过土壤水分控制进行不同田间持水量干旱胁迫处理,结合生理生化指标,研究转NF-YB8基因杨树对干旱胁迫的响应机制,为杨树的抗性育种研究提供重要的基础理论依据和基因应用资源。主要研究结果如下:1、成功从毛果杨中克隆出PtNF-YB8基因并建立了完整的遗传转化体系。2、克隆到的PtNF-YB8基因编码的蛋白具有螺旋-环-螺旋二级结构,含有NF-YB蛋白保守结构域和功能氨基酸,结合模式植物拟南芥NF-Y的基因进行系统进化分析,预测杨树NF-YB8转录因子可能对于调控杨树抗旱起重要作用。3、通过叶片形态、相对含水量以及叶绿素含量分析表明:干旱胁迫下,在田间持水量为50%处理下,NF-YB8株系抗旱性高于717株系和K-717株系。4...
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
杨树NF-YB基因家族成员外显子-内含子结构分析
西北农林科技大学硕士学位论文22图3717杨的遗传转化过程A共培养；B选择培养；C生成抗性芽；D完整的抗性植株Fig.3Genetictransformationofpoplar717在选择培养基中培养2-3周后，叶片变成透明状，叶片有机质被消耗殆尽，在伤口处已经形成诱导芽（图3B）。在选择培养基中培养4-5周后，部分叶片表面会长出许多不定芽（图3C），当不定芽长度为1-2cm时，剪下不定芽移至生根培养基中（含30mg/LKan）继续进行筛选，约3周左右生根形成完整幼苗（图3D）。筛选出的抗性芽从生根长至具有5-7片真叶的完整植株所需时间约为6-8周。本实验中，我们初步得到了转NF-YB8基因的5个转化再生株系。将转化过程中得到的具有Kan抗性的组培苗进行快速扩繁用于PCR检测，以进行阳性验证。ABCD
第三章PtNF-YB8基因克隆及遗传转化233.4.2NF-YB8过表达植株的PCR检测图4转NF-YB8基因植株的PCR检测结果1-5：转NF-YB8基因植株；6：DLMaker2000；7：717杨阴性对照；8：清水空白对照；9：NF-YB8质粒阳性对照Fig.4ThePCRresultsoftransgenicNF-YB8plants1-5：TransgenicNF-YB8Plant；6：DLMaker2000；7：717negativecontrols；8：WaterControl；9：NF-YB8plasmid-positivecontrols将经过Kan+初步筛选得到的转NF-YB8基因植株幼苗和717杨幼苗提取总RNA，随即进行反转录得到各株系的cDNA。以转基因杨树各株系的总cDNA为模板，含NF-YB8基因所对应的质粒为阳性对照，阴性对照为清水（无菌）和717杨的总cDNA，然后用预先设计好的引物进行PCR扩增。图4的PCR结果显示，清水和717杨无任何条带扩出；NF-YB8基因质粒在566bp处有明显的目的条带；得到的转基因植株中只有4个株系扩增出566bp的条带，这与预期目的条带的大小一致。由此结果可初步判断已经将目的基因片段导入这4个株系中。
本文编号：3124892
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
杨树NF-YB基因家族成员外显子-内含子结构分析
西北农林科技大学硕士学位论文22图3717杨的遗传转化过程A共培养；B选择培养；C生成抗性芽；D完整的抗性植株Fig.3Genetictransformationofpoplar717在选择培养基中培养2-3周后，叶片变成透明状，叶片有机质被消耗殆尽，在伤口处已经形成诱导芽（图3B）。在选择培养基中培养4-5周后，部分叶片表面会长出许多不定芽（图3C），当不定芽长度为1-2cm时，剪下不定芽移至生根培养基中（含30mg/LKan）继续进行筛选，约3周左右生根形成完整幼苗（图3D）。筛选出的抗性芽从生根长至具有5-7片真叶的完整植株所需时间约为6-8周。本实验中，我们初步得到了转NF-YB8基因的5个转化再生株系。将转化过程中得到的具有Kan抗性的组培苗进行快速扩繁用于PCR检测，以进行阳性验证。ABCD
第三章PtNF-YB8基因克隆及遗传转化233.4.2NF-YB8过表达植株的PCR检测图4转NF-YB8基因植株的PCR检测结果1-5：转NF-YB8基因植株；6：DLMaker2000；7：717杨阴性对照；8：清水空白对照；9：NF-YB8质粒阳性对照Fig.4ThePCRresultsoftransgenicNF-YB8plants1-5：TransgenicNF-YB8Plant；6：DLMaker2000；7：717negativecontrols；8：WaterControl；9：NF-YB8plasmid-positivecontrols将经过Kan+初步筛选得到的转NF-YB8基因植株幼苗和717杨幼苗提取总RNA，随即进行反转录得到各株系的cDNA。以转基因杨树各株系的总cDNA为模板，含NF-YB8基因所对应的质粒为阳性对照，阴性对照为清水（无菌）和717杨的总cDNA，然后用预先设计好的引物进行PCR扩增。图4的PCR结果显示，清水和717杨无任何条带扩出；NF-YB8基因质粒在566bp处有明显的目的条带；得到的转基因植株中只有4个株系扩增出566bp的条带，这与预期目的条带的大小一致。由此结果可初步判断已经将目的基因片段导入这4个株系中。
本文编号：3124892
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/lylw/3124892.html
