小黑杨PnATXs蛋白的抗氧化功能鉴定及PnATX1基因的遗传转化
发布时间：2021-07-07 08:32
小黑杨（Populus simonii×Populus nigra）是杨柳科杨属乔木,具有抗旱、耐寒、耐瘠薄等优良性状,是适合北方的造林树种。ATX1（Anti-oxidant）是一种具有抗氧化功能的蛋白,在生物的铜稳态调控过程中发挥重要作用。本研究利用小黑杨PnATXs基因构建酵母表达载体,通过酵母功能互补试验验证了 PnATXs蛋白的抗氧化及铜伴侣功能。克隆小黑杨PnATXs基因的启动子,生物信息学分析证实小黑杨PnATXs启动子区域存在铜应答元件CuRE,并通过GUS染色初步确定PnATX1和PnATX2全长启动子具有生物学活性。构建PnATX1基因的植物表达载体后遗传转化小黑杨,并获得了转基因植株。通过以上试验得到的主要研究结果如下:（1）利用构建的ATX基因的酵母表达载体转化酵母突变体sod1△和atx1△。结果表明,转化后的酵母sod1△细胞可以在有氧状态下的SC-Lys培养基上生长,由此确定PnATXs蛋白具有抗氧化功能;酵母atx1△细胞在转化后可以在含有铁螯合剂的培养基中生长,由此确定PnATXs蛋白具有铜伴侣蛋白功能。（2）利用毛果杨基因组序列设计引物,通过PCR方...
【文章来源】：东北林业大学黑龙江省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－１葡萄铜稳态的相关基因在铜胁迫条件下的表达??黑色代表表达量无变化，红色代表表达量上调，白色代表表达量下调
核苷酸序列设计引物，以哥伦比亚野生型拟南芥ｃＤＮＡ为模板克隆基因，将扩增??的基因连接到ｐＥＡＳＹ－Ｂｈｍｔ克隆载体上。转化大肠杆菌感受态细胞后提取质粒，并进行酵??母基因和拟南芥ＪＬ４７Ｘ／基因的ＰＣＲ鉴定，结果如图２－１所示。??Ｍ?１?２?Ｍ?３?４??２０００ｂｐ?破＼??２５０ｂｐ??图２－１酵母＊Ｓｃ４７Ｘ７基因和拟南芥／ＩＭｍ基因ｐＥＡＳＹ重组质粒的ＰＣＲ结果??Ｍ：?ＤＬ２０００ｍａｒｋｅｒ；?１、２：?ｐＥＡＳＹ－ＳｃＺＴＸｉ；?３、４：?ｐＥＡＳＹｖ４ｔ４０７。??重组质粒的测序结果表明，酵母Ｓｏ４７Ｘ？基因和拟南芥ＷＭ７Ｘ７基因克隆成功。以克??隆的质粒为模板，扩增含酶切位点的基因片段，将扩增片段和载体ｐＹＥＳ２同时酶切（如??图２－２）、回收、连接后，将连接产物转化大肠杆菌并送测，经测序验证正确后即成功构建??重组载体ＰＹＥＳ２Ｕ７Ｘ／和ｐＹＥＳ２－ＪＭ７Ｘ／，重组载体ＰＣＲ检测结果如图２－３所示。??Ｍｌ?１?Ｍｌ?２?Ｍ２?３?４??２〇〇〇ｂｐ??２５０ｂｐ?｜?、－?＇?－?＾??图２－２酵母Ｓｃ／ｉｒａ基因、拟南芥ｄｔ４７Ｘ７基因和ｐＹＥＳ２质粒的酶切结果??Ｍｌ：?ＤＬ２０００ｍａｒｋｅｒ；?１：?酶切产物；２：?酶切产物；Ｍ２：?ＤＬ１５０００?ｍａｒｋｅｒ；?３：??ｐＹＥＳ２质粒酶切产物；４：?ｐＹＥＳ２质粒。??－１６－??
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【参考文献】：
期刊论文
[1]小叶杨CCH基因的克隆及其在重金属胁迫下的表达模式[J]. 刁姝,苏晓华,丁昌俊,张冰玉. 林业科学研究. 2015(01)
[2]Conservation and Diversity of MicroRNA-associated Copper-regulatory Networks in Populus trichocarpa[J]. Vincent L.Chiang. Journal of Integrative Plant Biology. 2011(11)
[3]铜在植物细胞中的运输和分布[J]. 张红晓,张芬琴. 洛阳理工学院学报(自然科学版). 2011(03)
[4]西伯利亚蓼铜伴侣蛋白基因在盐胁迫条件下的表达分析[J]. 刘关君,曲春浦,刘明坤,魏志刚,刘桂丰,杨传平. 中国生物化学与分子生物学报. 2008(11)
[5]江西德兴铜矿铜污染状况调查及植物修复研究[J]. 黄长干,邱业先. 土壤通报. 2005(06)
[6]重金属污染土壤植物修复法[J]. 唐莲,刘振中,蒋任飞. 环境保护科学. 2003(06)
本文编号：3269305
【文章来源】：东北林业大学黑龙江省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－１葡萄铜稳态的相关基因在铜胁迫条件下的表达??黑色代表表达量无变化，红色代表表达量上调，白色代表表达量下调
核苷酸序列设计引物，以哥伦比亚野生型拟南芥ｃＤＮＡ为模板克隆基因，将扩增??的基因连接到ｐＥＡＳＹ－Ｂｈｍｔ克隆载体上。转化大肠杆菌感受态细胞后提取质粒，并进行酵??母基因和拟南芥ＪＬ４７Ｘ／基因的ＰＣＲ鉴定，结果如图２－１所示。??Ｍ?１?２?Ｍ?３?４??２０００ｂｐ?破＼??２５０ｂｐ??图２－１酵母＊Ｓｃ４７Ｘ７基因和拟南芥／ＩＭｍ基因ｐＥＡＳＹ重组质粒的ＰＣＲ结果??Ｍ：?ＤＬ２０００ｍａｒｋｅｒ；?１、２：?ｐＥＡＳＹ－ＳｃＺＴＸｉ；?３、４：?ｐＥＡＳＹｖ４ｔ４０７。??重组质粒的测序结果表明，酵母Ｓｏ４７Ｘ？基因和拟南芥ＷＭ７Ｘ７基因克隆成功。以克??隆的质粒为模板，扩增含酶切位点的基因片段，将扩增片段和载体ｐＹＥＳ２同时酶切（如??图２－２）、回收、连接后，将连接产物转化大肠杆菌并送测，经测序验证正确后即成功构建??重组载体ＰＹＥＳ２Ｕ７Ｘ／和ｐＹＥＳ２－ＪＭ７Ｘ／，重组载体ＰＣＲ检测结果如图２－３所示。??Ｍｌ?１?Ｍｌ?２?Ｍ２?３?４??２〇〇〇ｂｐ??２５０ｂｐ?｜?、－?＇?－?＾??图２－２酵母Ｓｃ／ｉｒａ基因、拟南芥ｄｔ４７Ｘ７基因和ｐＹＥＳ２质粒的酶切结果??Ｍｌ：?ＤＬ２０００ｍａｒｋｅｒ；?１：?酶切产物；２：?酶切产物；Ｍ２：?ＤＬ１５０００?ｍａｒｋｅｒ；?３：??ｐＹＥＳ２质粒酶切产物；４：?ｐＹＥＳ２质粒。??－１６－??
核苷酸序列设计引物，以哥伦比亚野生型拟南芥ｃＤＮＡ为模板克隆基因，将扩增??的基因连接到ｐＥＡＳＹ－Ｂｈｍｔ克隆载体上。转化大肠杆菌感受态细胞后提取质粒，并进行酵??母基因和拟南芥ＪＬ４７Ｘ／基因的ＰＣＲ鉴定，结果如图２－１所示。??Ｍ?１?２?Ｍ?３?４??２０００ｂｐ?破＼??２５０ｂｐ??图２－１酵母＊Ｓｃ４７Ｘ７基因和拟南芥／ＩＭｍ基因ｐＥＡＳＹ重组质粒的ＰＣＲ结果??Ｍ：?ＤＬ２０００ｍａｒｋｅｒ；?１、２：?ｐＥＡＳＹ－ＳｃＺＴＸｉ；?３、４：?ｐＥＡＳＹｖ４ｔ４０７。??重组质粒的测序结果表明，酵母Ｓｏ４７Ｘ？基因和拟南芥ＷＭ７Ｘ７基因克隆成功。以克??隆的质粒为模板，扩增含酶切位点的基因片段，将扩增片段和载体ｐＹＥＳ２同时酶切（如??图２－２）、回收、连接后，将连接产物转化大肠杆菌并送测，经测序验证正确后即成功构建??重组载体ＰＹＥＳ２Ｕ７Ｘ／和ｐＹＥＳ２－ＪＭ７Ｘ／，重组载体ＰＣＲ检测结果如图２－３所示。??Ｍｌ?１?Ｍｌ?２?Ｍ２?３?４??２〇〇〇ｂｐ??２５０ｂｐ?｜?、－?＇?－?＾??图２－２酵母Ｓｃ／ｉｒａ基因、拟南芥ｄｔ４７Ｘ７基因和ｐＹＥＳ２质粒的酶切结果??Ｍｌ：?ＤＬ２０００ｍａｒｋｅｒ；?１：?酶切产物；２：?酶切产物；Ｍ２：?ＤＬ１５０００?ｍａｒｋｅｒ；?３：??ｐＹＥＳ２质粒酶切产物；４：?ｐＹＥＳ２质粒。??－１６－??
【参考文献】：
期刊论文
[1]小叶杨CCH基因的克隆及其在重金属胁迫下的表达模式[J]. 刁姝,苏晓华,丁昌俊,张冰玉. 林业科学研究. 2015(01)
[2]Conservation and Diversity of MicroRNA-associated Copper-regulatory Networks in Populus trichocarpa[J]. Vincent L.Chiang. Journal of Integrative Plant Biology. 2011(11)
[3]铜在植物细胞中的运输和分布[J]. 张红晓,张芬琴. 洛阳理工学院学报(自然科学版). 2011(03)
[4]西伯利亚蓼铜伴侣蛋白基因在盐胁迫条件下的表达分析[J]. 刘关君,曲春浦,刘明坤,魏志刚,刘桂丰,杨传平. 中国生物化学与分子生物学报. 2008(11)
[5]江西德兴铜矿铜污染状况调查及植物修复研究[J]. 黄长干,邱业先. 土壤通报. 2005(06)
[6]重金属污染土壤植物修复法[J]. 唐莲,刘振中,蒋任飞. 环境保护科学. 2003(06)
本文编号：3269305
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