橡胶树花青素合成分子机制的初步研究

发布时间：2021-07-21 01:39

　　橡胶树转基因改良和高通量基因功能验证,迫切需要高效转基因体系,然而,虽然橡胶树转基因频率得到很大提高,但是,转基因筛选效率非常低。花青素是一种肉眼直接可辨、简单、安全的的转基因筛选标记,但是,由于花青素合成调控基因物种间通用性差、异源表达花青素累积组织预期性差和组成型表达往往影响植物生长发育,导致在橡胶树等植物转基因筛选中尚未广泛应用。为了建立基于花青素累积的橡胶树转基因筛选系统,主要开展如下研究:1.橡胶树花青素种类和含量分析:采用3mol/l盐酸水浴的方法,提取橡胶树体细胞胚、古铜期、变色期、淡绿期和稳定期叶片、暗培养和光照培养幼苗韧皮部等组织的花青素,并进行高效液相色谱（HPLC）分析,发现不同组织均合成一定量花青素,尤其特别的是乳白色胚状体也累积少量花青素,不同组织花青素均主要以矢车菊素为主。2.花青素累积相关关键结构基因发掘:通过转录组注释和基因组同源比对,克隆花青素合成代谢途径结构基因及其同源基因27个,qRT-PCR分析发现,HbCHS、HbF3H、HbF3,H、HbLDOX和HbUFGT表达量与花青素含量正相关。3.体细胞胚花青素累积诱导:本研究采用140 mg L-1... 

【文章来源】：海南大学海南省 211工程院校

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１橡胶树不同组织的颜色表型??Ａ：暗培养体胚再生植株；Ｂ：光照培养体胚再生植株；Ｃ：体细胞胚；Ｄ－Ｇ：自??然条件下生长的古铜期（Ｄ）、变色期（Ｅ）、淡绿期和稳定期（Ｇ）的叶蓬．标尺为??

图４橡胶树花青素结构基因的克隆??Ｆｉｇ．４?Ｔｈｅ?ｃｌｏｎｅ?ｏｆ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｇｅｎｅ，?ｍａｒｋｅｒ：?ＤＬ２０００??２．２生物进化树的构建??橡胶树关键结构基因系统进化树的构建，卜：要为ＨＨ、ＬＤＯＸ、ＵＦＧＴ，从ＮＣＢＩ??上：尽可能Ｉ载花青素结构基因的基因序列，用Ｐｒｉｍｅｒ?５软件转化为氨基酸序列，??用Ｍｅｇａ５软件构建系统进化树。??ｐ?Ｄｉｍｏｃａｒｐｕｓ?ｌｏｎｇａｎ??■—?Ｌｉｔｃｈｉ?ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ??＿??Ｍｏｒｎｓ?ｎｏｔａｂｉｌｉｓ???？—?Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍ?ｈｉｒｓｕｔｕｍ??ＴＴｉｅｏｂｒｏｍａ?ｃａｃａｏ??Ｈｅ疋ａ?ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ??？?Ｃａｎａｒｉｕｍ?ａｌｂｕｍ??Ｐｙｍｓ?ｃｏｍｍｕｎｉｓ??

片和戊二醛固定的石蜡切片进行观察。结果表明，在切片中可以看到并不是所有??细胞都变成紫红色，并不是所有细胞都有花青素的积累，变红的细胞主要集中在??子叶轴的两侧。此外变红细胞的数量比在正常条件下培养时要多的多（图６）。??图６外施ＭｅＪＡ巴西橡胶树体细胞胚花青素的积累??Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎ?ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ?ｉｎ?ｓｏｍａｔｉｃ?ｅｍｂｒｙｏ?ｂｙ?ＪＡ??３６??

【参考文献】：
期刊论文
[1]花青素合成转录因子基因在玉米中的表达研究:一种新型基因可视化跟踪表达系统[J]. 宫硖,杨凤萍,薛静,陈绪清,张立全,李向龙,张晓东.  科学通报. 2012(24)
[2]花青素合成调节基因VlmybA2遗传转化水稻的研究[J]. 杨芸菲,吕立堂,赵德刚.  贵州大学学报(自然科学版). 2012(03)



本文编号：3294036