巴西橡胶树热研7-33-97第4，12，17和18号染色体文库的构建及序列分析
发布时间：2021-09-04 11:46
橡胶树是天然橡胶的主要来源。巴西橡胶树（Heveabrasiliensis）是目前国内外产生胶乳的重要物种。对巴西橡胶树进行深入的分子细胞学研究在橡胶树的育种上具有重要意义。近年来,研究者们先后在2013、2016和2017年采用高通量测序技术完成了 RRIM600、热研7-33-97、BPM24等巴西橡胶树品种的全基因组测序,但拼接水平仅达到scaffold水平。其遗传图谱、连锁群等信息并没有与染色体进行对应,功能基因在染色体组上位置和连锁关系尚未完全确定。目前的研究结果直接应用于橡胶树育种的难度较大,本研究构建了巴西橡胶树单染色体文库,可在一定程度上解决此问题。本课题组成员在国内从2013年率先开启了巴西橡胶树单染色体文库的构建工作,其他有关此方面的研究尚未见报道。故本研究从其单染色体入手,运用单染色体显微分离、LA-PCR法扩增单条染色体技术,构建了 4条巴西橡胶树单染色体文库,旨在为橡胶树的分子辅助育种提供理论基础。研究结果如下:（1）本研究采用微细玻璃针法成功地从巴西橡胶树热研7-33-97多个中期分裂相细胞中分离出31条单染色体。挑选出其中4条,用LA-PCR法对单染色体进...
【文章来源】：海南大学海南省 211工程院校
【文章页数】：94 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２不同预处理时间的染色体形态??Ａ：预处理１．５ｈ；?Ｂ：预处理２ｈ；?Ｃ：预处理２．５ｈ??
３．４．１基因组ＤＮＡ提取和酶切??采用改良后的ＣＴＡＢ法提取热研７－３３－９７基因组ＤＮＡ。将提取的基因组ＤＮＡ取??４…点样于１．０％的琼脂糖凝胶进行电泳检测，结果如图５Ａ。从图５Ａ可以看出：橡??胶树基因组ＤＮＡ电泳条带清晰明亮、条带单一、无明显降解现象，基因组ＤＮＡ分??子量略高于２３１３０?６卩。用８３￡｜＜〇１３１１－０１］７３０核酸分析仪检测浓度及纯度，通过检测结??果计算出ＤＮＡ浓度为３０６?ｎｇ／）ｎｌ，且纯度较高。说明提取的基因组ＤＮＡ质量良好，??纯度高，可以用于后续试验。??取适量巴西橡胶树热研７－３３－９７基因组ＤＮＡ经ＱｕｉｃｋＣｕｔ？?￡ｃｏＭ酶切丨２?ｍｉｎ后，??点样于Ｌ０％琼脂糖凝胶进行电泳检测，结果如图５Ｂ，第１￣５泳道为酶切ＤＮＡ，第６??泳道为阴性对照。从图５Ｂ中可见：第１￣５泳道条带呈弥散性，大小介于０．８？６ｋｂ之??间
图中２？９即表示探针稀释的浓度梯度，２代表的浓度最高，为ｌＯｐｇ／ｕｌ，?９代表的??浓度最低，为０。??图６中可见，Ｂ、Ｃ两种探针均在６号点有明显阳性反应，说明这两种探针效力??达到０．丨ｐｇ级，标记成功可用于后续实验；Ｄ探针仅在４号点之前有阳性反应，标记??效力为ｌｐｇ级
【参考文献】：
期刊论文
[1]四个橡胶树主要栽培品种的核型分析[J]. 马梦茹,王英,庄南生,高和琼. 基因组学与应用生物学. 2017(01)
[2]葎草单染色体的显微分离及DOP-PCR技术体系建立[J]. 秦瑞云,李双双,李书粉,袁金红,高武军,邓传良. 河南师范大学学报(自然科学版). 2016(06)
[3]巴西橡胶树HbNAM基因克隆和表达分析[J]. 康桂娟,黎瑜,曾日中. 南京林业大学学报(自然科学版). 2016(01)
[4]巴西橡胶树单染色体显微分离及其两种体外扩增方法比较[J]. 殷卉,王英,高和琼,庄南生. 分子植物育种. 2015(11)
[5]世界橡胶(树)发展传播史初论[J]. 张箭. 中国农史. 2015(03)
[6]经济树种全基因组测序成果要报[J]. 冉洪,张莹,胡陶,冯云,廉超,郭起荣. 经济林研究. 2015(02)
[7]巴西橡胶树HbMKK4基因的克隆及表达分析[J]. 吴绍华,张世鑫,杨署光,田维敏. 西北植物学报. 2015(03)
[8]单细胞测序技术研究进展[J]. 董燕,宋程程,黄鹤. 化学工业与工程. 2015(01)
[9]巴西橡胶树胶乳转化酶HbNIN基因家族物理定位的研究[J]. 高佳佳,王英,高和琼,朱稳,庄南生. 热带作物学报. 2014(09)
[10]一个巴西橡胶树过氧化物酶基因克隆与生物信息学分析[J]. 邓玉杰,余海洋,张宇,王萌. 热带农业工程. 2014(04)
博士论文
[1]海南橡胶树种质资源经济价值研究[D]. 王芳.海南大学 2012
[2]棉花单染色体分离和DNA纤维FISH及其应用研究[D]. 彭仁海.中国农业科学院 2009
[3]利用荧光原位杂交技术（FISH）对中国明对虾和栉孔扇贝若干重要基因定位的研究[D]. 郇聘.中国科学院研究生院（海洋研究所） 2009
[4]橡胶树分子遗传图谱的构建及相关性状的初步定位[D]. 和丽岗.华南热带农业大学 2007
硕士论文
[1]巴西橡胶树热研7-33-97三条染色体文库的构建及第4号染色体高通量测序初步分析[D]. 殷卉.海南大学 2016
[2]巴西橡胶树遗传图谱15个标记的物理定位[D]. 彭宝丰.海南大学 2016
[3]巴西橡胶树单染色体显微分离及其8号染色体高通量测序的初步研究[D]. 姚宇飞.海南大学 2015
[4]巴西橡胶树SUT和RZF基因家族物理定位的研究[D]. 官锦燕.海南大学 2014
[5]巴西橡胶树热研7-33-97第1，5和9号染色体的分离及文库的构建[D]. 陈学俊.海南大学 2014
[6]雷蒙德氏棉和黄褐棉部分单染色体的鉴定[D]. 覃琴.中国农业科学院 2013
[7]银杏单染色体文库的建立与鉴定[D]. 肖青苹.福建农林大学 2012
[8]琯溪蜜柚BAC文库末端序列测序及Blast2GO分析[D]. 郭金鹏.福建农林大学 2012
[9]亚洲棉7号染色体文库构建及RGA克隆[D]. 刘玉玲.中国农业科学院 2010
[10]巴西橡胶树REF、RT和SRPP基因物理定位的研究[D]. 邱海燕.海南大学 2010
本文编号：3383204
【文章来源】：海南大学海南省 211工程院校
【文章页数】：94 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２不同预处理时间的染色体形态??Ａ：预处理１．５ｈ；?Ｂ：预处理２ｈ；?Ｃ：预处理２．５ｈ??
３．４．１基因组ＤＮＡ提取和酶切??采用改良后的ＣＴＡＢ法提取热研７－３３－９７基因组ＤＮＡ。将提取的基因组ＤＮＡ取??４…点样于１．０％的琼脂糖凝胶进行电泳检测，结果如图５Ａ。从图５Ａ可以看出：橡??胶树基因组ＤＮＡ电泳条带清晰明亮、条带单一、无明显降解现象，基因组ＤＮＡ分??子量略高于２３１３０?６卩。用８３￡｜＜〇１３１１－０１］７３０核酸分析仪检测浓度及纯度，通过检测结??果计算出ＤＮＡ浓度为３０６?ｎｇ／）ｎｌ，且纯度较高。说明提取的基因组ＤＮＡ质量良好，??纯度高，可以用于后续试验。??取适量巴西橡胶树热研７－３３－９７基因组ＤＮＡ经ＱｕｉｃｋＣｕｔ？?￡ｃｏＭ酶切丨２?ｍｉｎ后，??点样于Ｌ０％琼脂糖凝胶进行电泳检测，结果如图５Ｂ，第１￣５泳道为酶切ＤＮＡ，第６??泳道为阴性对照。从图５Ｂ中可见：第１￣５泳道条带呈弥散性，大小介于０．８？６ｋｂ之??间
图中２？９即表示探针稀释的浓度梯度，２代表的浓度最高，为ｌＯｐｇ／ｕｌ，?９代表的??浓度最低，为０。??图６中可见，Ｂ、Ｃ两种探针均在６号点有明显阳性反应，说明这两种探针效力??达到０．丨ｐｇ级，标记成功可用于后续实验；Ｄ探针仅在４号点之前有阳性反应，标记??效力为ｌｐｇ级
【参考文献】：
期刊论文
[1]四个橡胶树主要栽培品种的核型分析[J]. 马梦茹,王英,庄南生,高和琼. 基因组学与应用生物学. 2017(01)
[2]葎草单染色体的显微分离及DOP-PCR技术体系建立[J]. 秦瑞云,李双双,李书粉,袁金红,高武军,邓传良. 河南师范大学学报(自然科学版). 2016(06)
[3]巴西橡胶树HbNAM基因克隆和表达分析[J]. 康桂娟,黎瑜,曾日中. 南京林业大学学报(自然科学版). 2016(01)
[4]巴西橡胶树单染色体显微分离及其两种体外扩增方法比较[J]. 殷卉,王英,高和琼,庄南生. 分子植物育种. 2015(11)
[5]世界橡胶(树)发展传播史初论[J]. 张箭. 中国农史. 2015(03)
[6]经济树种全基因组测序成果要报[J]. 冉洪,张莹,胡陶,冯云,廉超,郭起荣. 经济林研究. 2015(02)
[7]巴西橡胶树HbMKK4基因的克隆及表达分析[J]. 吴绍华,张世鑫,杨署光,田维敏. 西北植物学报. 2015(03)
[8]单细胞测序技术研究进展[J]. 董燕,宋程程,黄鹤. 化学工业与工程. 2015(01)
[9]巴西橡胶树胶乳转化酶HbNIN基因家族物理定位的研究[J]. 高佳佳,王英,高和琼,朱稳,庄南生. 热带作物学报. 2014(09)
[10]一个巴西橡胶树过氧化物酶基因克隆与生物信息学分析[J]. 邓玉杰,余海洋,张宇,王萌. 热带农业工程. 2014(04)
博士论文
[1]海南橡胶树种质资源经济价值研究[D]. 王芳.海南大学 2012
[2]棉花单染色体分离和DNA纤维FISH及其应用研究[D]. 彭仁海.中国农业科学院 2009
[3]利用荧光原位杂交技术（FISH）对中国明对虾和栉孔扇贝若干重要基因定位的研究[D]. 郇聘.中国科学院研究生院（海洋研究所） 2009
[4]橡胶树分子遗传图谱的构建及相关性状的初步定位[D]. 和丽岗.华南热带农业大学 2007
硕士论文
[1]巴西橡胶树热研7-33-97三条染色体文库的构建及第4号染色体高通量测序初步分析[D]. 殷卉.海南大学 2016
[2]巴西橡胶树遗传图谱15个标记的物理定位[D]. 彭宝丰.海南大学 2016
[3]巴西橡胶树单染色体显微分离及其8号染色体高通量测序的初步研究[D]. 姚宇飞.海南大学 2015
[4]巴西橡胶树SUT和RZF基因家族物理定位的研究[D]. 官锦燕.海南大学 2014
[5]巴西橡胶树热研7-33-97第1，5和9号染色体的分离及文库的构建[D]. 陈学俊.海南大学 2014
[6]雷蒙德氏棉和黄褐棉部分单染色体的鉴定[D]. 覃琴.中国农业科学院 2013
[7]银杏单染色体文库的建立与鉴定[D]. 肖青苹.福建农林大学 2012
[8]琯溪蜜柚BAC文库末端序列测序及Blast2GO分析[D]. 郭金鹏.福建农林大学 2012
[9]亚洲棉7号染色体文库构建及RGA克隆[D]. 刘玉玲.中国农业科学院 2010
[10]巴西橡胶树REF、RT和SRPP基因物理定位的研究[D]. 邱海燕.海南大学 2010
本文编号：3383204
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