银杏种胚发育的差异蛋白质组学研究

发布时间：2021-09-09 18:36

　　为探究具有后熟特性种子休眠解除机制,本试验以银杏（Ginkgo biloba L.）种子为试材,取其种胚作为研究对象。分别从蛋白的不同提取方法（直接提取法、酚提取法、Tris-HCl法、Trizol提取法和TCA-丙酮-酚法）、裂解液中的尿素浓度（6mol/L、7mol/L、 8mol/L、9mol/L）、蛋白上样量（1500μg、1650 μg、1800μg）和分离胶浓度（10%、12.5%、15%）等4个方面对银杏种胚的蛋白图谱进行优化,筛选出适宜双向电泳的条件；通过对银杏种胚形态大小等级的划分,进一步判断不同发育状态种胚的发芽能力；在此基础上,根据银杏种胚形态大小的不同,筛选与种胚发育相关的差异蛋白,并对找到的差异蛋白进行质谱分析。探究银杏种胚后熟的发育机制,为揭示种子萌发的分子机制奠定基础。本研究主要结果如下：1.采用TCA-丙酮-酚法提取银杏种胚蛋白,在裂解液中尿素浓度为8mol/L、上样量为1650μg、分离胶浓度为12.5%的方法,可以获得分辨率较高、背景更加清晰、重复性更好的银杏种胚蛋白质双向电泳图谱。建立了适合银杏种胚蛋白双向电泳的体系。2.按种胚长度将银杏种胚发育分... 

【文章来源】：沈阳农业大学辽宁省

【文章页数】：71 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 种子发育过程中的蛋白质组研究
        1.1.1 组织分化阶段的关键蛋白
        1.1.2 与胚和胚乳发育相关的蛋白
        1.1.3 成熟干燥阶段的关键蛋白
    1.2 种子休眠相关的蛋白质组研究
    1.3 种子萌发过程中的蛋白质组研究
        1.3.1 种子吸胀相关的蛋白质
        1.3.2 种子代谢相关的蛋白质
        1.3.3 种子胚根伸长相关的蛋白质
        1.3.4 种子萌发期间代谢途径的研究
    1.4 本研究目的与意义
第二章 银杏种胚蛋白质双向电泳体系的建立
    2.1 材料与方法
        2.1.1 仪器与试剂
        2.1.2 银杏种胚蛋白提取方法
        2.1.3 裂解液浓度
        2.1.4 蛋白上样量
        2.1.5 双向电泳
        2.1.6 染色
        2.1.7 图像扫描与数据分析
    2.2 结果与分析
        2.2.1 不同提取方法所得2-DE图谱的比较
        2.2.2 裂解液中不同尿素浓度所得2-DE图谱的比较
        2.2.3 不同上样量所得2-DE图谱的比较
        2.2.4 不同分离胶浓度所得2-DE图谱的比较
    2.3 讨论
        2.3.1 不同蛋白提取方法对2-DE结果的影响
        2.3.2 裂解液中不同尿素浓度对2-DE结果的影响
        2.3.3 不同蛋白上样量对2-DE结果的影响
        2.3.4 不同分离胶浓度对2-DE结果的影响
第三章 不同发育状态银杏种胚差异蛋白质组学的研究
    3.1 材料
    3.2 方法
        3.2.1 银杏种胚的分级
        3.2.2 发芽银杏种子胚长的确定
        3.2.3 银杏种胚发芽能力的测定
        3.2.4 蛋白质的提取
        3.2.5 蛋白质裂解及定量
        3.2.6 双向凝胶电泳
        3.2.7 染色
        3.2.8 质谱分析
    3.3 结果与分析
        3.3.1 发芽银杏种子胚长的确定
        3.3.2 银杏种胚体外培养
        3.3.3 不同发育时期表达差异蛋白双向电泳图谱分析
        3.3.4 不同发育时期表达差异蛋白点的质谱鉴定结果
        3.3.5 不同发育时期表达差异蛋白点的功能分类
        3.3.6 胁迫与防御相关差异蛋白动态变化
    3.4 讨论
        3.4.1 参与蛋白合成与折叠相关蛋白
        3.4.2 DNA与RNA合成相关蛋白
        3.4.3 胁迫与防御相关的蛋白
        3.4.4 与代谢相关的蛋白
        3.4.5 贮藏蛋白
        3.4.6 运输相关的蛋白
        3.4.7 种胚生长相关蛋白
        3.4.8 银杏特有功能蛋白
        3.4.9 未知蛋白
第四章 结论
参考文献
致谢
攻读硕士期间发表论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]不同未知功能结构域蛋白家族（DUFs）基因在植物中的生物学功能[J]. 罗成科,肖国举,李明.  植物生理学报. 2015(02)
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[3]强休眠玉米种子休眠前后的蛋白差异表达[J]. 兰海,冷亦峰,周树峰,刘坚,荣廷昭.  植物遗传资源学报. 2015(01)
[4]植物冷休克结构域蛋白的生物学功能研究进展[J]. 何俊平,王建平,朱家成,张书芬,文雁成,曹金华,赵磊.  湖北农业科学. 2014(14)
[5]种子休眠与萌发分子机制研究进展[J]. 赖晓辉,李群.  种子. 2014(05)
[6]水稻几丁质酶基因的转录与表达特征[J]. 范伟,李雪姣,关明俐,缪刘杨,史佳楠,窦世娟,刘丽娟,李莉云,刘国振.  作物学报. 2014(04)
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[10]天女木兰种子蛋白双向电泳体系的建立[J]. 张晓林,陆秀君,马蓓蓓,徐凯.  西北农林科技大学学报(自然科学版). 2012(08)

博士论文
[1]真核翻译起始因子eIF3和eIF5的结构生物学研究[D]. 魏志毅.中国科学技术大学 2007

硕士论文
[1]椰肉发育过程中差异表达基因的分离和功能注释[D]. 梁远学.海南大学 2014



本文编号：3392582