巨尾桉谷胱甘肽还原酶的克隆及其在低温胁迫下的表达模式分析

发布时间：2021-10-12 14:49

　　植物在生物或非生物胁迫下,细胞质的铜锌超氧化物歧化酶（Copper/Zincsuperoxide dismutases,简称Cu/Zn SOD,CSD）通过超氧化物歧化酶的铜分子伴侣（Copper chaperone for superoxide dismutase,简称CCS）途径和非依赖CCS激活途径激活从而发挥抗氧化解毒作用。生物细胞内谷胱甘肽还原酶（Glutathione reductase,简称GR）催化氧化型谷胱甘肽转化为还原型谷胱甘肽（glutathione,GSH）,GSH可能将铜离子运送至SOD并使其激活,该酶可能与植物细胞质CSD的非CCS激活途径相关。本研究通过RT-PCR的方法克隆了长度为1485bp、编码495个氨基酸的巨尾桉谷胱甘肽还原酶（Gen Bank Accession Number:KU904639）,该酶定位于植物细胞质。构建了p ET-Eu GR原核表达载体并建立了GR的原核表达体系:37℃,0.1m M的IPTG浓度,诱导4h时GR能够稳定表达。通过GR酶活检测表明转化菌株p ET-Eu GR的GR活性均高于对照菌株,说明外源基因的原核表达产物... 

【文章来源】：华侨大学福建省

【文章页数】：82 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

植物中三种CSD的激活途径[5]

他因子的协同作用。除了植物体外，人体内也有 GSH 能够参与非 CCS 激活途径的有力证据。例如，Marjatta Son[18]等人通过研究表达 CSD 但缺乏铜离子伴侣的转基因小鼠线粒体对于 SOD1 激活途径的作用发现，人类的 SOD1 能够利用 GSH 通过非依赖于CCS 激活途径获取 Cu2+，形成分子内部的二硫化物，并且与依赖于 CCS 激活途径不同的是，非依赖于 CCS 的激活并不需要氧气可能甚至在还原状态下发挥作用。综合近年来的实验结果，目前研究者已经预测出两种 GSH 作为运铜载体的作用模型：其一是 GSH 与 Cu2+、CSD 与未知的支架蛋白因子相互作用形成支架蛋白-GSH-Cu2+-CSD 四聚复合体，随后复合体中 GSH 将 Cu2+交付给 CSD 使其激活同时复合体解体重新释放 GSH 和支架蛋白；其二是 GSH 与 Cu2+结合后与某种未知的支架蛋白形成复合体，GSH 将 Cu2+交付于支架蛋白后重新释放，随后支架蛋白将携带的 Cu2+转移至 CSD 并使其激活[19]。而这种未知蛋白目前尚不明确。

第 2 章 巨尾桉 GR 基因的克隆带亮度约为 28s 条带亮度的两倍，而 5s 条带由RNA 纯化试剂盒纯化巨尾桉总 RNA，（1%琼脂p 左右出现一条拖尾 mRNA 条带），可继续后续实R 克隆巨尾桉 GR 基因mRNA 为模板，巨尾桉 FSD 基因的引物作为阳性对目的片段进行 RT-PCR 扩增。取胶回收产物 2 μ 2.2，其中 GR 基因的引物 1、3 未扩增出预测的500 bp 大小的目的条带，我们选择该单一条带作回收产物 2 μL，进行 1%琼脂糖凝胶电泳，结果

【参考文献】：
期刊论文
[1]铜伴侣蛋白CCS介导铜锌-超氧化物歧化酶激活的过程[J]. 唐玲,冯琳,刘扬,胡凯,周小秋.  动物营养学报. 2011(08)



本文编号：3432786