杨树SPR1互作蛋白的鉴定及功能初探
发布时间：2021-11-08 02:59
微管由α-微管蛋白和β-微管蛋白以异二聚体的形式聚合而成,与微丝和中间纤维共同组成了细胞骨架。微管在植物细胞形态、植株生长发育、木材形成和抗逆等方面具有重要作用。微管列阵的动态变化与功能受到微管蛋白和微管结合蛋白的调控。SPR1蛋白是植物特有的一种微管结合蛋白,各项研究表明SPR1参与调节周质微管列阵的排列,从而对植物细胞的生长方向产生影响,并促进盐胁迫下微管的解聚,提高植物对盐胁迫的耐受性。目前对林木微管蛋白功能的研究鲜有报道,特别是微管调控林木形态与材性的分子机制的研究尚属空白,且关于林木SPR1蛋白的功能及其对微管的调控机制尚不明确。为获得观察微管形态的活体材料,本研究以毛果杨微管蛋白Pt TUA5和Pt TUB16基因序列为模板设计引物,同源克隆得到了84K杨的84KTUA5和84KTUB16基因序列,分别构建84KTUA5和84KTUB16与红色荧光蛋白m Cherry融合的四种植物过表达载体,经过烟草瞬时表达验证后转化84K杨;以毛果杨SPR1基因序列为模板设计引物,对84K杨的84KSPR1基因进行同源克隆,通过酵母双杂交技术筛选84KSPR1的候选互作蛋白,利用Bi F...
【文章来源】：北京林业大学北京市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：95 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
微管蛋白的异二聚体晶体结构（刁磊，2019）
PCR鉴定结果
植物过表达载体的构建及84K杨遗传转化25由北京擎科公司完成。载体构建过程如图3-1所示图3-1植物表达载体的构建过程Fig3-1Constructionprocessofplantexpressionvector3.1.2.2农杆菌转化将构建成功的重组质粒通过电击转化法转入农杆菌GV3101中。质粒提取步骤同3.1.2.1，电击转化法如下：（1）取1μL质粒加入100μLGV3101感受态细胞中混匀，转入预冷后的1mm电转杯中，用电转仪进行电击；（2）电击后，在电转杯中分次加入共600μLLB液体培养基与菌液混匀，转入1.5mLEP管中，200rpm，28℃振荡培养3h；（3）将菌液涂布在含有Rif（50mg/L）、Kana（50mg/L）和Gent（50mg/L）的LB固体培养基上，28℃倒置培养2天左右，（4）挑取单菌落接种到5mL含Rif（50mg/L）、Kana（50mg/L）和Gent（50mg/L）的LB液体培养基中，28℃，220rpm振荡培养15h，用于保菌及后续实验；同时进行菌落PCR鉴定，PCR鉴定所用引物84KTUA5-UTR和84KTUA16-UTR的序列信
本文编号：3482871
【文章来源】：北京林业大学北京市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：95 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
微管蛋白的异二聚体晶体结构（刁磊，2019）
PCR鉴定结果
植物过表达载体的构建及84K杨遗传转化25由北京擎科公司完成。载体构建过程如图3-1所示图3-1植物表达载体的构建过程Fig3-1Constructionprocessofplantexpressionvector3.1.2.2农杆菌转化将构建成功的重组质粒通过电击转化法转入农杆菌GV3101中。质粒提取步骤同3.1.2.1，电击转化法如下：（1）取1μL质粒加入100μLGV3101感受态细胞中混匀，转入预冷后的1mm电转杯中，用电转仪进行电击；（2）电击后，在电转杯中分次加入共600μLLB液体培养基与菌液混匀，转入1.5mLEP管中，200rpm，28℃振荡培养3h；（3）将菌液涂布在含有Rif（50mg/L）、Kana（50mg/L）和Gent（50mg/L）的LB固体培养基上，28℃倒置培养2天左右，（4）挑取单菌落接种到5mL含Rif（50mg/L）、Kana（50mg/L）和Gent（50mg/L）的LB液体培养基中，28℃，220rpm振荡培养15h，用于保菌及后续实验；同时进行菌落PCR鉴定，PCR鉴定所用引物84KTUA5-UTR和84KTUA16-UTR的序列信
本文编号：3482871
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