南京构树黄化卷叶病植原体的研究及其它几种植原体的检测

发布时间：2021-11-10 09:58

　　植原体（phytoplasma）是一种没有细胞壁的植物病原细菌,寄主范围十分广泛,侵染多种果树、林木和花卉植物。植原体目前尚无法在体外培养导致其研究受到限制。植原体病害在我国发生很普遍,如山东、陕西、云南等地都有很多植原体病害的报道,而近年来江苏地区却鲜有这方面的研究。本研究对南京部分地区的疑似植原体病害进行了检测和鉴定,对其中导致构树黄化卷叶病的植原体进行了较详细的研究,包括植原体对寄主的抗氧化相关酶的影响、致病相关的TENGU基因、抗原膜蛋白的表达、分泌系统等,为进一步了解植原体与寄主的相互作用,从分子水平揭示植原体的致病机理提供重要依据。本研究首次发现16SrI组植原体侵染构树造成构树叶片黄化、卷叶、畸形等症状,植原体侵染造成的桑树白化、凌霄白化、三角槭黄化病也是国内首次报道。主要研究结果如下:（1）构树黄化卷叶病等植原体的鉴定:用植原体16SrDNA、核糖体蛋白基因（rp）和转录延伸因子基因（tuf’）的通用引物对疑似植原体感染的构树总DNA进行直接PCR和巢式PCR扩增并測序验证。结果表明,构树叶片黄化卷叶症状与植原体感染有关,该植原体上述特定的基因序列与16S rl-B组中... 

【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：114 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一部分 文献综述
    一、植原体(phytoplasma)及植原体病害的研究进展
        1. 植原体病害研究
        2. 植原体基因组
    二、植原体的分子生物学检测方法
        1. PCR检测
        2. 环介导等温扩增技术
        3. DNA条形码技术
        4. 限制性片段多态性分析
        5. 单链构象多态性分析
        6. 微阵列分析
    三、植原体的分类
        1. 植原体的分类学研究历史
        2. 植原体的分类
    四、植原体的致病因子及分泌系统
        4.1 植原体的毒力因子TENGU
        4.2 植原体的抗原膜蛋白(Amp)
        4.3 植原体的sec分泌系统
    五、本研究的主要内容、目的及意义
    参考文献
第一章 南京地区几种植原体的检测与鉴定
    第一节 构树黄化卷叶病植原体的检测与鉴定
        前言
        1 材料与方法
            1.1 材料与主要试剂
            1.2 患病枣树、患病构树和健康构树总DNA提取
            1.3 引物的合成
            1.4 直接PCR与巢式PCR
            1.5 PCR产物的纯化与克隆
            1.6 阳性转化子的获取
            1.7 目的片段的测序与同源性比较
            1.8 虚拟RFLP分析
            1.9 16S rDNA,rp,tuf基因的系统发育学分析
        2 结果分析
            2.1 构树感染植原体后的症状
            2.2 构树黄化卷叶病植原体16S rDNA、rp、tuf secY基因的PCR扩增
            2.3 构树黄化卷叶病植原体的16S rDNA,rp,tuf等基因的同源性分析
            2.4 基于构树黄化卷叶病植原体16S rDNA、rp以及tuf基因的系统发育学分析
        3 小结与讨论
    第二节 三角槭黄化病等几种植原体的16S rDNA的检测与分类
        前言
        1 材料与方法
            1.1 材料与主要试剂
            1.2 患病及健康植株总DNA的提取
            1.3 引物合成
            1.4 直接PCR与巢式PCR
            1.5 PCR产物回收与克隆
            1.6 目的片段的测序与序列同源性比较
            1.7 16S rDNA的系统发育学分析
        2 结果与分析
            2.1 感病植株的症状
            2.2 感病植株中植原体16S rDNA的PCR扩增
            2.3 感病植株中植原体16S rDNA的序列同源性比对及系统发育学分析
        3 小结与讨论
    本章小结与讨论
    参考文献
第二章 构树黄化卷叶病植原体TENGU毒力因子的初步研究
    前言
    1 材料与方法
        1.1 实验材料及主要试剂
        1.2 实验方法
    2 结果与分析
        2.1 TENGU基因的扩增
        2.2 TENGU基因的克隆及序列分析
        2.3 TENGU基因植物表达载体的构建
        2.4 转基因拟南芥植株的获得
        2.5 转基因植株的分子鉴定
    3 小结与讨论
    参考文献
第三章 构树黄化卷叶病植原体sec分泌系统3个亚基的克隆及其蛋白特性的分析
    前言
    1 材料与方法
        1.1 实验试剂
        1.2 菌株与质粒
        1.3 构树DNA的提取
        1.4 sec分泌系统3个亚基基因的PCR扩增
        1.5 pMD 19-T-sec重组载体的构建
        1.6 测序及同源性比对
    2 结果与分析
        2.1 secA、secY和secE基因序列测定及分析
        2.2 secA、secY和secE的生物信息学分析
    3 小结与讨论
    参考文献
第四章 构树黄化卷叶病植原体抗原膜蛋白(Amp)的克隆及外源表达
    前言
    1 材料与方法
        1.1 材料与试剂
        1.2 方法
    2 结果与分析
        2.1 植原体抗原膜蛋白Amp基因的扩增与质粒的提取
        2.2 重组表达载体pET-28a(+)-Amp的验证
        2.3 Amp蛋白的表达及纯化
    3 小结与讨论
    参考文献
第五章 感染植原体的构树的抗氧化相关酶活的变化
    前言
    1. 材料与方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2. 结果与分析
        2.1 多酚氧化酶(PPO)活性
        2.2 过氧化物酶(POD)活性
        2.3 过氧化氢酶(CAT)活性
        2.4 超氧化物歧化酶(SOD)活性
        2.5 丙二醛(MDA)含量
    3. 小结与讨论
    参考文献
全文总结
    一、本文获得的主要结果
    二、本文的主要创新点
    三、尚待解决的问题
攻读硕士期间发表的学术论文
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]植原体病害研究进展[J]. 范国权,韩树鑫,白艳菊,高艳玲,张威,张抒,申宇,刘凯,喻江.  黑龙江农业科学. 2015(11)
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[3]环介导等温扩增技术在病原菌检测中的应用[J]. 刘芳,黄静敏,何永盛,李传礼.  检验检疫学刊. 2013(06)
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[6]细菌的IV型分泌系统[J]. 赵岩,李明,胡福泉.  生命的化学. 2011(01)
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博士论文
[1]西北地区常见植物植原体病害分子鉴定及株系多样性研究[D]. 李正男.西北农林科技大学 2015

硕士论文
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[2]植原体免疫膜蛋白Imp的原核表达及多克隆抗体制备[D]. 柴化建.安徽农业大学 2012
[3]槟榔黄化病植株生理生化指标比较分析[D]. 陶明福.海南大学 2010
[4]丛枝病植原体在泡桐体内分布特点和周年变化规律的研究[D]. 介大委.河南农业大学 2009
[5]泡桐丛枝植原体中国株系的分子鉴定及免疫膜蛋白基因表达研究[D]. 史英姿.西北农林科技大学 2007
[6]国槐分类学与繁殖特性研究[D]. 赵燕.山东师范大学 2007



本文编号：3487068