毛竹叶黄酮碳苷C-糖基化途径及其C-糖基转移酶的研究
发布时间：2022-01-05 23:39
毛竹叶中含有大量具有生物活性的黄酮碳苷,C-糖基转移酶（C-glycosyltransferase,CGT）是黄酮碳苷生物合成代谢途径中C-糖基化的关键酶。目前,还没有关于毛竹叶黄酮碳苷的C-糖基化途径及其CGT的报道。本研究从毛竹叶中通过提取、硫酸铵分层沉淀、透析、葡聚糖凝胶过滤、阴离子交换层析、超滤脱盐等方法分离纯化CGT,并对以上分离纯化过程进行优化。分别选择圣草素查尔酮、圣草素、木犀草素作为底物,根据已建立的CGT催化的C-糖基化反应体系,进行可能的C-糖基化途径验证。运用数据库搜索比对和Q-TOF检测分析等方法手段,找出毛竹CGT的基因序列和一级结构氨基酸序列。取得如下结果:1.实验以CGT反应体系中产物和底物的主要黄酮（荭草苷、异荭草苷、圣草素查尔酮、圣草素、木犀草素）为目标,以相应的标准品为对照,建立了高效液相色谱检测方法:Water XTerra?MS C18 5μm（250 mm×4.6 mm）色谱柱;流动相为乙腈、5‰乙酸/水缓冲液,梯度洗脱。从精密度、稳定性和回收率对该方法进行评价。毛竹叶黄酮碳苷CGT反应体系的建立:通过研究缓冲盐p H,反应温度,反应时间,底物...
【文章来源】：中国林业科学研究院北京市
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
毛竹林Fig.1-1P.edulisforest
该方法具有灵敏度高，分辨率高，质应用于生物大分子质谱分析的软离子化技术主要辅助激光解吸电离质谱（MALDI-MS）、快原子轰（ISI-MS），其中最常用的是 ESI-MS 和 MALDy1z1R1OR2OR3OR4x3z2x1z3x2y2y3
图 2-1 350 nm 处五种标准品的 HPLC 色谱图Fig.2-1 The HPLC chromatogram of the mixed standards at 350 nm1-异荭草苷; 2-荭草苷; 3-圣草素查尔酮; 4-圣草素; 5-木犀草素1-Isoorientin; 2-Orientin; 3-Eriodictyol chalcone; 4- Eriodictyol; 5-LuteolinWater XTerra MS C18 5 μm (250 mm×4.6 mm) 色谱柱；流动相为乙腈、5‰乙酸/水液，梯度洗脱，洗脱方法见表 2-5；流速 1 mL/min；柱温 30 oC；进样量 10 μL。圣查尔酮、圣草素的检测波长是 289.1nm，木犀草素、荭草苷以及异荭草苷的检测波为 350 nm。以保留时间以及紫外吸收波长定性，峰面积测定五种黄酮的变化。图 2-1350 nm 处五种标准品混合液的 HPLC 色谱图。从图中可以看出在以上的色谱条件下五合物可以完全分开。.1.2 方法与性能评价）标准曲线
【参考文献】：
期刊论文
[1]蒜氨酸酶与凝集素的分离纯化及质谱鉴定分析[J]. 王威,谢岩黎. 河南工业大学学报(自然科学版). 2017(04)
[2]杨树酚酸糖基转移酶基因PtSGT1的克隆及其酶活性鉴定[J]. 于惠敏,张海龙,张帜,王会勇,侯丙凯. 植物生理学报. 2016(06)
[3]软体动物牡蛎肌联蛋白一级结构的预测[J]. 包玉龙,张三润,徐宋瑶,周好乐. 畜牧与饲料科学. 2016(12)
[4]淡竹叶黄酮对大鼠心肌缺血-再灌注损伤作用研究[J]. 汪新亮. 亚太传统医药. 2015(06)
[5]毛竹资源及其综合利用途径[J]. 郑友苗. 安徽农业科学. 2013(31)
[6]葛根糖基转移酶蛋白肽段序列的分离与鉴定[J]. 刘吉升,吴璇,吕旻,苏良辰,周文灵,李玲. 生物技术. 2011(01)
[7]竹叶黄酮的提取工艺及抑菌作用研究[J]. 陈海光,于立梅,黄东雨. 仲恺农业工程学院学报. 2010(03)
[8]人参皂苷Rh2葡萄糖基转移酶活性测定体系的建立[J]. 何彦平,岳才军. 安徽农业科学. 2010(11)
[9]用清除羟自由基法评价竹叶提取物抗氧化能力[J]. 郭雪峰,岳永德,孟志芬,汤锋,王进,姚曦,荀航,孙嘏. 光谱学与光谱分析. 2010(02)
[10]植物糖基转移酶及其在代谢工程中的应用[J]. 周文灵,陈刚,王瑛华,李玲. 生物技术. 2009(06)
博士论文
[1]箬竹属竹叶化学成分研究[D]. 喻谨.中国林业科学研究院 2014
[2]牡竹属竹叶化学成分研究[D]. 王淑英.中国林业科学研究院 2013
[3]苦竹属竹叶化学成分及其生物活性研究[D]. 魏琦.中国林业科学研究院 2013
[4]撑篙竹（Bambusa pervariabilis McClure）竹叶化学成分及其生物活性的研究[D]. 孙嘏.中国林业科学研究院 2010
[5]竹叶特征性黄酮类化合物研究[D]. 焦晶晶.浙江大学 2008
硕士论文
[1]新型N-糖基转移酶酶学性质以及蛋白N-糖链修饰的研究[D]. 李江.山东大学 2017
[2]糖基转移酶GT1及内切葡聚糖酶An5晶体结构研究[D]. 颜俊杰.江南大学 2016
[3]毛竹叶中抑菌活性成分的提取及其分析[D]. 姚志蕊.江南大学 2008
[4]毛竹主要病害综合治理研究[D]. 周旭.福建农林大学 2006
[5]几种天然抗氧化剂对DNA的保护作用及其分子放射生物学机制的研究[D]. 徐兵.浙江大学 2001
本文编号：3571265
【文章来源】：中国林业科学研究院北京市
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
毛竹林Fig.1-1P.edulisforest
该方法具有灵敏度高，分辨率高，质应用于生物大分子质谱分析的软离子化技术主要辅助激光解吸电离质谱（MALDI-MS）、快原子轰（ISI-MS），其中最常用的是 ESI-MS 和 MALDy1z1R1OR2OR3OR4x3z2x1z3x2y2y3
图 2-1 350 nm 处五种标准品的 HPLC 色谱图Fig.2-1 The HPLC chromatogram of the mixed standards at 350 nm1-异荭草苷; 2-荭草苷; 3-圣草素查尔酮; 4-圣草素; 5-木犀草素1-Isoorientin; 2-Orientin; 3-Eriodictyol chalcone; 4- Eriodictyol; 5-LuteolinWater XTerra MS C18 5 μm (250 mm×4.6 mm) 色谱柱；流动相为乙腈、5‰乙酸/水液，梯度洗脱，洗脱方法见表 2-5；流速 1 mL/min；柱温 30 oC；进样量 10 μL。圣查尔酮、圣草素的检测波长是 289.1nm，木犀草素、荭草苷以及异荭草苷的检测波为 350 nm。以保留时间以及紫外吸收波长定性，峰面积测定五种黄酮的变化。图 2-1350 nm 处五种标准品混合液的 HPLC 色谱图。从图中可以看出在以上的色谱条件下五合物可以完全分开。.1.2 方法与性能评价）标准曲线
【参考文献】：
期刊论文
[1]蒜氨酸酶与凝集素的分离纯化及质谱鉴定分析[J]. 王威,谢岩黎. 河南工业大学学报(自然科学版). 2017(04)
[2]杨树酚酸糖基转移酶基因PtSGT1的克隆及其酶活性鉴定[J]. 于惠敏,张海龙,张帜,王会勇,侯丙凯. 植物生理学报. 2016(06)
[3]软体动物牡蛎肌联蛋白一级结构的预测[J]. 包玉龙,张三润,徐宋瑶,周好乐. 畜牧与饲料科学. 2016(12)
[4]淡竹叶黄酮对大鼠心肌缺血-再灌注损伤作用研究[J]. 汪新亮. 亚太传统医药. 2015(06)
[5]毛竹资源及其综合利用途径[J]. 郑友苗. 安徽农业科学. 2013(31)
[6]葛根糖基转移酶蛋白肽段序列的分离与鉴定[J]. 刘吉升,吴璇,吕旻,苏良辰,周文灵,李玲. 生物技术. 2011(01)
[7]竹叶黄酮的提取工艺及抑菌作用研究[J]. 陈海光,于立梅,黄东雨. 仲恺农业工程学院学报. 2010(03)
[8]人参皂苷Rh2葡萄糖基转移酶活性测定体系的建立[J]. 何彦平,岳才军. 安徽农业科学. 2010(11)
[9]用清除羟自由基法评价竹叶提取物抗氧化能力[J]. 郭雪峰,岳永德,孟志芬,汤锋,王进,姚曦,荀航,孙嘏. 光谱学与光谱分析. 2010(02)
[10]植物糖基转移酶及其在代谢工程中的应用[J]. 周文灵,陈刚,王瑛华,李玲. 生物技术. 2009(06)
博士论文
[1]箬竹属竹叶化学成分研究[D]. 喻谨.中国林业科学研究院 2014
[2]牡竹属竹叶化学成分研究[D]. 王淑英.中国林业科学研究院 2013
[3]苦竹属竹叶化学成分及其生物活性研究[D]. 魏琦.中国林业科学研究院 2013
[4]撑篙竹（Bambusa pervariabilis McClure）竹叶化学成分及其生物活性的研究[D]. 孙嘏.中国林业科学研究院 2010
[5]竹叶特征性黄酮类化合物研究[D]. 焦晶晶.浙江大学 2008
硕士论文
[1]新型N-糖基转移酶酶学性质以及蛋白N-糖链修饰的研究[D]. 李江.山东大学 2017
[2]糖基转移酶GT1及内切葡聚糖酶An5晶体结构研究[D]. 颜俊杰.江南大学 2016
[3]毛竹叶中抑菌活性成分的提取及其分析[D]. 姚志蕊.江南大学 2008
[4]毛竹主要病害综合治理研究[D]. 周旭.福建农林大学 2006
[5]几种天然抗氧化剂对DNA的保护作用及其分子放射生物学机制的研究[D]. 徐兵.浙江大学 2001
本文编号：3571265
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