油茶炭疽病新病原遗传结构及其内生拮抗菌定殖途径研究
发布时间：2022-01-16 23:39
油茶炭疽病（Camellia oleifera anthracnose）是油茶主要病害之一,严重影响油茶品质和产量。我们研究发现其主要的病原菌不止胶孢炭疽菌一种,其中新病原果生刺盘孢菌Colletotrichum fructicola分布广泛、危害严重。本文开展了油茶炭疽病新病原果生刺盘孢菌鉴定和群体遗传结构的分析；利用油茶内生拮抗细菌Y13对C. fructicola进行盆栽苗防效实验；利用绿色荧光蛋白基因标记诱变后的优良油茶内生拮抗细菌Y13uv,研究其在油茶体内的定殖动态。主要研究成果如下：（1）基于多基因系统发育分析的油茶新炭疽病原鉴定。对来自我国6个省市的油茶炭疽病样本进行病原菌分离,通过形态学特征结合多基因谱系分析法构建系了统发育树。分离到能引起油茶叶炭疽病的病原菌共23株。多基因系统发育树结果表明,这23株病原菌与模式菌株ICMP18581在内的所有果生刺盘孢菌C. fructicola菌株序列聚为一个进化支,置信度高达100%。由此确定这23株病原菌为果生刺盘孢菌C.fructicola。（2）新炭疽病原果生刺盘孢菌C. fructicola群体遗传结构分析。对来自我国...
【文章来源】：中南林业科技大学湖南省
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２．１回接实验油茶叶片炭痕病病斑??ａ：自然发病症状；ｂ：接种发病症状??
?０?５?１０?１５?２０??Ｐａｉｒｗｉｓｅ?Ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ??图３．３?Ｃ如ｗｃ仇群体核昔酸不配对分布??Ｆｉｇ?３．３?Ｍｉｓｍａｔｃｈ?ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏ打?ｏｆ?Ｃ方ｗｃ／ｚ．ｃｏ／ａ?ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ．巨ｘｐ?ｓｔａｎｄｓ?ｆｏｒ?ｅｘｐｅｃ巧ｄ?ｖａｌｕｅ．?ｓｔａｎｄｓ?ｆｏｒ?ｏｂｓｅｒｖｅｄ?ｖａｌｕｅ．??５基于ＩＴＳ序列的系统发育分析??我们从ＧｅｎＢａｎｋ数据库中选择刺盘抱属不同种的１０条Ｉ与实验推导出的１３种不同单倍型序列（Ｈ１－Ｈ１３）构建系统发育树图３．表明，在系统树中没有发现同一个地区的单倍型能聚在一起，而是散乱系统树中，说明其间存在有效基因流，部分地理种群虽然各自具有独特，但各单倍型的差异不大。从系统发育树中，我们还可Ｗ看出，１３种列与?ＧｅｎＢａ址中?Ｃ／ｒｗｃ化〇／口（ＪＸ０１０１７７、ＪＸ０１０１８１、ＪＸ０１０１７３、ＪＸ０１０１００％的置信度聚为一支，由此也验证了我们分离的１４５个菌株都为果生。??ＪＸ０１０１。。ｆｒｕｒｆｋｏ／＊??—Ｈ９??
通过连续稀释转接培养，巧光质粒随着转接次数的增加，培养时间的延长，??质粒不断地从Ｙ１３ＵＶ－ＧＦＰ菌体细胞中丢失，巧光蛋白标记菌在总茜落群体中数??量比例渐渐下降；无选择压力条件下转接培养５化后的稳定性可达７２％（图４．２）。??芽抱杆菌在实验室适宜条件下大约２０?ｍｉｎ分裂一代，而其在自然条件下分裂一??代所需时间为５０？１００ｈ［８３］。结果表明标记菌株Ｙ１３ＵＶ－ＧＦＰ有较强的遗传稳定性，??可用于检测其在油茶体内的定殖动态。??脚「??一鄕．＂一￣＂？一??复跑－?？??Ｉ?６０?－??谁??為姗－??柩??２０?－??Ｑ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ???，?Ｉ??１２?３?４５６７８９?１０??转辖次数（５?ｈ／次〉??图４．２Ｙ１３ＵＶ－ＧＦＰ的质粒稳定性检测??Ｆｉｇ?４．２?Ｐｌａｓｍｉｄ?ｓｔａｂｉｌｉｔｙ?ｄ別ｅｃｔｉｏｎ?ｏｆ?化６?Ｙ１３ＵＶ－ＧＦＰ?ｓｔｒａｉｎｓ??３２??
【参考文献】：
期刊论文
[1]枯草芽孢杆菌防治玉米纹枯病的初步研究[J]. 毛腾霄,叶华智,秦玉花. 中国农学通报. 2016(05)
[2]柑橘炭疽病菌的生物学特性及枯草芽胞杆菌对其的抑制作用[J]. 邹娟,姚卓,尚永华. 植物保护. 2016(01)
[3]枯草芽孢杆菌与吡唑醚菌酯及其混配对葡萄炭疽病菌的抑菌活性与田间防病效果（英文）[J]. 吉沐祥,毛妮妮,李国平,姚克兵,刘吉祥,陈宏州,吴祥,郭建,芮东明. Agricultural Science & Technology. 2015(12)
[4]多基因序列鉴定油茶炭疽病原Colletotrichum boninense新种[J]. 汤铱泠,周国英,李河,钟文斌,龚洪恩,王丽云. 热带作物学报. 2015(05)
[5]一种新油茶炭疽病原多基因序列鉴定[J]. 李河,周国英,徐建平. 植物保护. 2015(02)
[6]云南葡萄炭疽病菌遗传多样性分析[J]. 邓维萍,杜飞,杨敏,杨积忠,何霞红,王海宁,李成云,朱书生. 云南农业大学学报(自然科学). 2015(02)
[7]枯草芽胞杆菌PTS-394的GFP标记及其定殖能力[J]. 刘邮洲,梁雪杰,乔俊卿,张荣胜,陈志谊. 植物保护学报. 2014(04)
[8]绿色荧光蛋白标记的枯草芽胞杆菌R31在西芹根际定殖研究[J]. 陈燕红,黎永坚,喻国辉,陈远凤. 中国农学通报. 2014(09)
[9]拮抗细菌Y13对油茶炭疽病防治试验[J]. 高月庭,周国英,何小勇,王明月. 浙江林业科技. 2014(02)
[10]茶树炭疽菌Colletotrichum fructicola的鉴定及系统发育分析[J]. 刘威,叶乃兴,陈玉森,连玲丽,刘伟,金珊,赖建东,谢运海. 茶叶科学. 2014(01)
硕士论文
[1]红掌炭疽病病原的鉴定、分子检测及群体遗传多样性研究[D]. 邢红梅.南京农业大学 2007
[2]枯草芽孢杆菌B-332菌株及其抗菌物质对稻瘟病的生防作用研究[D]. 穆常青.中国农业科学院 2006
[3]胶孢炭疽菌的遗传多样性[D]. 陈希芹.四川农业大学 2004
本文编号：3593630
【文章来源】：中南林业科技大学湖南省
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２．１回接实验油茶叶片炭痕病病斑??ａ：自然发病症状；ｂ：接种发病症状??
?０?５?１０?１５?２０??Ｐａｉｒｗｉｓｅ?Ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ??图３．３?Ｃ如ｗｃ仇群体核昔酸不配对分布??Ｆｉｇ?３．３?Ｍｉｓｍａｔｃｈ?ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏ打?ｏｆ?Ｃ方ｗｃ／ｚ．ｃｏ／ａ?ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ．巨ｘｐ?ｓｔａｎｄｓ?ｆｏｒ?ｅｘｐｅｃ巧ｄ?ｖａｌｕｅ．?ｓｔａｎｄｓ?ｆｏｒ?ｏｂｓｅｒｖｅｄ?ｖａｌｕｅ．??５基于ＩＴＳ序列的系统发育分析??我们从ＧｅｎＢａｎｋ数据库中选择刺盘抱属不同种的１０条Ｉ与实验推导出的１３种不同单倍型序列（Ｈ１－Ｈ１３）构建系统发育树图３．表明，在系统树中没有发现同一个地区的单倍型能聚在一起，而是散乱系统树中，说明其间存在有效基因流，部分地理种群虽然各自具有独特，但各单倍型的差异不大。从系统发育树中，我们还可Ｗ看出，１３种列与?ＧｅｎＢａ址中?Ｃ／ｒｗｃ化〇／口（ＪＸ０１０１７７、ＪＸ０１０１８１、ＪＸ０１０１７３、ＪＸ０１０１００％的置信度聚为一支，由此也验证了我们分离的１４５个菌株都为果生。??ＪＸ０１０１。。ｆｒｕｒｆｋｏ／＊??—Ｈ９??
通过连续稀释转接培养，巧光质粒随着转接次数的增加，培养时间的延长，??质粒不断地从Ｙ１３ＵＶ－ＧＦＰ菌体细胞中丢失，巧光蛋白标记菌在总茜落群体中数??量比例渐渐下降；无选择压力条件下转接培养５化后的稳定性可达７２％（图４．２）。??芽抱杆菌在实验室适宜条件下大约２０?ｍｉｎ分裂一代，而其在自然条件下分裂一??代所需时间为５０？１００ｈ［８３］。结果表明标记菌株Ｙ１３ＵＶ－ＧＦＰ有较强的遗传稳定性，??可用于检测其在油茶体内的定殖动态。??脚「??一鄕．＂一￣＂？一??复跑－?？??Ｉ?６０?－??谁??為姗－??柩??２０?－??Ｑ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ???，?Ｉ??１２?３?４５６７８９?１０??转辖次数（５?ｈ／次〉??图４．２Ｙ１３ＵＶ－ＧＦＰ的质粒稳定性检测??Ｆｉｇ?４．２?Ｐｌａｓｍｉｄ?ｓｔａｂｉｌｉｔｙ?ｄ別ｅｃｔｉｏｎ?ｏｆ?化６?Ｙ１３ＵＶ－ＧＦＰ?ｓｔｒａｉｎｓ??３２??
【参考文献】：
期刊论文
[1]枯草芽孢杆菌防治玉米纹枯病的初步研究[J]. 毛腾霄,叶华智,秦玉花. 中国农学通报. 2016(05)
[2]柑橘炭疽病菌的生物学特性及枯草芽胞杆菌对其的抑制作用[J]. 邹娟,姚卓,尚永华. 植物保护. 2016(01)
[3]枯草芽孢杆菌与吡唑醚菌酯及其混配对葡萄炭疽病菌的抑菌活性与田间防病效果（英文）[J]. 吉沐祥,毛妮妮,李国平,姚克兵,刘吉祥,陈宏州,吴祥,郭建,芮东明. Agricultural Science & Technology. 2015(12)
[4]多基因序列鉴定油茶炭疽病原Colletotrichum boninense新种[J]. 汤铱泠,周国英,李河,钟文斌,龚洪恩,王丽云. 热带作物学报. 2015(05)
[5]一种新油茶炭疽病原多基因序列鉴定[J]. 李河,周国英,徐建平. 植物保护. 2015(02)
[6]云南葡萄炭疽病菌遗传多样性分析[J]. 邓维萍,杜飞,杨敏,杨积忠,何霞红,王海宁,李成云,朱书生. 云南农业大学学报(自然科学). 2015(02)
[7]枯草芽胞杆菌PTS-394的GFP标记及其定殖能力[J]. 刘邮洲,梁雪杰,乔俊卿,张荣胜,陈志谊. 植物保护学报. 2014(04)
[8]绿色荧光蛋白标记的枯草芽胞杆菌R31在西芹根际定殖研究[J]. 陈燕红,黎永坚,喻国辉,陈远凤. 中国农学通报. 2014(09)
[9]拮抗细菌Y13对油茶炭疽病防治试验[J]. 高月庭,周国英,何小勇,王明月. 浙江林业科技. 2014(02)
[10]茶树炭疽菌Colletotrichum fructicola的鉴定及系统发育分析[J]. 刘威,叶乃兴,陈玉森,连玲丽,刘伟,金珊,赖建东,谢运海. 茶叶科学. 2014(01)
硕士论文
[1]红掌炭疽病病原的鉴定、分子检测及群体遗传多样性研究[D]. 邢红梅.南京农业大学 2007
[2]枯草芽孢杆菌B-332菌株及其抗菌物质对稻瘟病的生防作用研究[D]. 穆常青.中国农业科学院 2006
[3]胶孢炭疽菌的遗传多样性[D]. 陈希芹.四川农业大学 2004
本文编号：3593630
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