毛果杨铵转运蛋白PtrAMT1;6功能鉴定和遗传转化
发布时间：2022-01-19 05:48
氮素营养对于林木的生长至关重要,是有机体最主要的组成物质之一,因此土壤中的氮素营养也成为林木生长发育的主要限制因素之一。同时由于粮食安全对国家繁荣与稳定具有举足轻重的地位,因此肥力较好的土壤一般用于农业生产,营造人工林往往选择肥力相对较弱的区域,另外人工林也无法像农作物一样,进行定期施肥,因此提高林木在贫瘠土壤中的氮素吸收与利用效率,对促进林木在贫瘠土壤上的生长具有重要意义。AMT是植物体内铵吸收和转移的重要的转运子,主要从事根部对于环境中铵的吸收和转运以及地上部分铵的重吸收。本试验对毛果杨铵转运蛋白家族成员PtrAkT1;6基因进行了表达模式、功能鉴定和遗传转化等研究,结果如下：（1）荧光定量PCR结果显示：PtrAMT1;6基因偏好在叶片中表达,并且在成熟叶片中的表达显著高于幼嫩叶片；对毛果杨PtrAMT1;6基因进行光周期定量,结果显示,PtrAMT1;6基因具有黑暗诱导和光抑制的表达模式：（2）酵母铵转运蛋白突变体31019b突变体功能恢复试验结果表明,PtrAMT1;6基因恢复了突变体高亲和力铵转运的能力；（3）用pCAMBIA-PtrAMT1;6P转化拟南芥,并对转化系进行...
【文章来源】：东北林业大学黑龙江省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 绪论
1.1 植物与氮素营养
1.2 杨树与氮素营养
1.2.1 杨树的社会经济价值
1.2.2 氮素营养与杨树生长发育
1.3 植物对于氮素营养的吸收和同化
1.3.1 植物对于氮素营养的吸收
1.3.2 硝酸根转运蛋白(NRT)
1.3.3 铵转运蛋白(AMT)
1.3.4 GS/GOGAT途径
1.4 地上部分铵的再利用
1.5 研究的目的和意义
2 毛果杨铵转运蛋白PtrAMT1；6的表达模式
2.1 材料
2.1.1 植物材料
2.1.2 试剂及器材
2.2 实验方法
2.2.1 材料处理
2.2.2 RNA的提取
2.2.3 cDNA制备
2.2.4 实时定量PCR
2.3 实验结果
2.3.1 RNA提取结果
2.3.2 荧光定量PCR结果
2.4 本章小结
3 酵母铵转运蛋白突变体的功能恢复
3.1 材料
3.1.1 载体和菌种
3.1.2 试验所用的试剂
3.1.3 酵母培养配制
3.1.4 试剂和器材
3.2 实验方法
3.2.1 基因序列分析
3.2.2 酵母表达载体pYES2-PtrAMT1；6构建
3.2.3 酵母感受态的制备和转化
3.2.4 酵母功能互补
3.3 实验结果
3.3.1 毛果杨和番茄AMT1家族蛋白N端序列多重比对
3.3.2 跨膜结构域预测
3.3.3 基因克隆及酵母表达载体pYES2-PtrAMT1；6载体构建
3.3.4 酵母功能互补
3.4 本章小结
4 PtrAMT1；6P：：GUS构建以及在拟南芥中的表达
4.1 材料
4.1.1 植物材料
4.1.2 载体和菌种
4.1.3 试剂和器材
4.2 实验方法
4.2.1 启动子元件分析
4.2.2 毛果杨基因组DNA的提取
4.2.3 毛果杨PtrAMT1；6启动子克隆和表达载体构建
4.2.4 农杆菌感受态的制备及转化
4.2.5 拟南芥种子表面消毒、萌发和幼苗移栽
4.2.6 拟南芥遗传转化和纯合转化系的筛选
4.2.7 GUS染色
4.3 实验结果
4.3.1 启动子元件分析
4.3.2 毛果杨PtrAMT1；6启动子克隆
4.3.3 PtrAMT1；6P：：GUS在拟南芥中的表达
4.4 本章小结
5 PtrAMT1；6在拟南芥中过表达
5.1 材料
5.1.1 植物材料
5.1.2 载体和菌种
5.1.3 培养基配制
5.1.4 实验所用试剂
5.2 实验方法
5.2.1 pROKE2-PtrAMT1；6表达载体的构建和农杆菌转化
5.2.2 拟南芥遗传转化和纯合系筛选和鉴定
5.2.3 拟南芥过表达转化株系在不同营养培养基上竖直生长
5.3 实验结果
5.3.1 载体pROKE2-PtrAMT1；6构建
5.3.2 PtrAMT1；6基因拟南芥纯合系PCR鉴定
5.3.3 转化系过表达定量检测
5.3.4 拟南芥不同氮素处理试验
5.4 本章小结
6 84K杨PtrAMT1；6基因遗传转化
6.1 材料
6.1.1 植物材料
6.1.2 菌种和载体
6.1.3 试验所用试剂盒
6.1.4 84K组织培养所用培养基配置
6.2 实验方法
6.2.1 过表达载体转化农杆菌
6.2.2 RNA干扰载体构建
6.2.3 外植体消毒和84K杨扩繁
6.2.4 农杆菌介导遗传转化
6.2.5 转化系分子鉴定
6.3 实验结果
6.3.1 过表达载体转化农杆菌
6.3.2 RNA干扰载体构建
6.3.3 84K杨PtrAMT1；6基因遗传转化
6.3.4 84K杨过表达系分子鉴定
6.3.5 84K杨过抑制系分子鉴定
6.4 本章小结
结论
参考文献
攻读学位期间发表的学术论文
致谢
本文编号：3596319
【文章来源】：东北林业大学黑龙江省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 绪论
1.1 植物与氮素营养
1.2 杨树与氮素营养
1.2.1 杨树的社会经济价值
1.2.2 氮素营养与杨树生长发育
1.3 植物对于氮素营养的吸收和同化
1.3.1 植物对于氮素营养的吸收
1.3.2 硝酸根转运蛋白(NRT)
1.3.3 铵转运蛋白(AMT)
1.3.4 GS/GOGAT途径
1.4 地上部分铵的再利用
1.5 研究的目的和意义
2 毛果杨铵转运蛋白PtrAMT1；6的表达模式
2.1 材料
2.1.1 植物材料
2.1.2 试剂及器材
2.2 实验方法
2.2.1 材料处理
2.2.2 RNA的提取
2.2.3 cDNA制备
2.2.4 实时定量PCR
2.3 实验结果
2.3.1 RNA提取结果
2.3.2 荧光定量PCR结果
2.4 本章小结
3 酵母铵转运蛋白突变体的功能恢复
3.1 材料
3.1.1 载体和菌种
3.1.2 试验所用的试剂
3.1.3 酵母培养配制
3.1.4 试剂和器材
3.2 实验方法
3.2.1 基因序列分析
3.2.2 酵母表达载体pYES2-PtrAMT1；6构建
3.2.3 酵母感受态的制备和转化
3.2.4 酵母功能互补
3.3 实验结果
3.3.1 毛果杨和番茄AMT1家族蛋白N端序列多重比对
3.3.2 跨膜结构域预测
3.3.3 基因克隆及酵母表达载体pYES2-PtrAMT1；6载体构建
3.3.4 酵母功能互补
3.4 本章小结
4 PtrAMT1；6P：：GUS构建以及在拟南芥中的表达
4.1 材料
4.1.1 植物材料
4.1.2 载体和菌种
4.1.3 试剂和器材
4.2 实验方法
4.2.1 启动子元件分析
4.2.2 毛果杨基因组DNA的提取
4.2.3 毛果杨PtrAMT1；6启动子克隆和表达载体构建
4.2.4 农杆菌感受态的制备及转化
4.2.5 拟南芥种子表面消毒、萌发和幼苗移栽
4.2.6 拟南芥遗传转化和纯合转化系的筛选
4.2.7 GUS染色
4.3 实验结果
4.3.1 启动子元件分析
4.3.2 毛果杨PtrAMT1；6启动子克隆
4.3.3 PtrAMT1；6P：：GUS在拟南芥中的表达
4.4 本章小结
5 PtrAMT1；6在拟南芥中过表达
5.1 材料
5.1.1 植物材料
5.1.2 载体和菌种
5.1.3 培养基配制
5.1.4 实验所用试剂
5.2 实验方法
5.2.1 pROKE2-PtrAMT1；6表达载体的构建和农杆菌转化
5.2.2 拟南芥遗传转化和纯合系筛选和鉴定
5.2.3 拟南芥过表达转化株系在不同营养培养基上竖直生长
5.3 实验结果
5.3.1 载体pROKE2-PtrAMT1；6构建
5.3.2 PtrAMT1；6基因拟南芥纯合系PCR鉴定
5.3.3 转化系过表达定量检测
5.3.4 拟南芥不同氮素处理试验
5.4 本章小结
6 84K杨PtrAMT1；6基因遗传转化
6.1 材料
6.1.1 植物材料
6.1.2 菌种和载体
6.1.3 试验所用试剂盒
6.1.4 84K组织培养所用培养基配置
6.2 实验方法
6.2.1 过表达载体转化农杆菌
6.2.2 RNA干扰载体构建
6.2.3 外植体消毒和84K杨扩繁
6.2.4 农杆菌介导遗传转化
6.2.5 转化系分子鉴定
6.3 实验结果
6.3.1 过表达载体转化农杆菌
6.3.2 RNA干扰载体构建
6.3.3 84K杨PtrAMT1；6基因遗传转化
6.3.4 84K杨过表达系分子鉴定
6.3.5 84K杨过抑制系分子鉴定
6.4 本章小结
结论
参考文献
攻读学位期间发表的学术论文
致谢
本文编号：3596319
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