白花泡桐DREB转录因子基因的克隆与表达分析
发布时间：2022-02-20 03:14
白花泡桐是我国特有的速生丰产树种,具有非常高的经济和生态价值。利用基因工程技术对白花泡桐进行品种改良,可以弥补常规育种方法的不足,加快白花泡桐在遗传育种方向的发展。在白花泡桐的生长过程中,干旱、盐害、极端温度等环境胁迫因子能够严重影响其生理活动以及生长发育。植物通过转录因子调控相关基因表达,可以在转录水平上对自身生理代谢和生长发育达到调节作用。DREB转录因子在植物中广泛存在,通过参与调控各种功能基因的表达,来提高植物的抗逆性。本研究在白花泡桐中克隆到白花泡桐的Pf DREB2基因,并对其进行了生物信息学分析,该基因具有DREB基因的基本特性。主要研究结果如下:1、本实验材料为白花泡桐叶片,根据DREB基因DNA结合域的保守区域设计并合成简并引物,扩增出DREB基因的同源片段,根据此同源片段设计特异性引物,通过RACE技术获得白花泡桐DREB基因全长序列,通过氨基酸序列比对发现,此基因为DREB2转录因子基因。2、分别以白花泡桐genomic DNA和c DNA为模板PCR扩增,通过对扩增的产物的序列分析发现,该基因不含有内含子。3、该基因c DNA序列全长1049bp,其完整的开放阅...
【文章来源】：河南农业大学河南省
【文章页数】：50 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
致谢
摘要
英汉缩略词对照
1 文献综述
1.1 植物抗逆分子机制
1.1.1 在逆境胁迫中直接发挥功能的蛋白
1.1.1.1 LEA蛋白
1.1.1.2 水通道蛋白
1.1.1.3 Na~+/H~+逆向转运蛋白
1.1.2 渗透调节因子
1.1.2.1 脯氨酸
1.1.2.2 甜菜碱
1.1.3 抗氧化防御相关酶
1.1.3.1 POD
1.1.3.2 SOD
1.1.4 感应传导胁迫信号、调控基因表达相关基因
1.2 植物抗逆相关转录因子
1.2.1 bZIP转录因子
1.2.2 MYB转录因子
1.2.3 WRKY转录因子
1.2.4 AP2/EREBP转录因子
1.3 DREB转录因子
1.3.1 DREB转录因子的结构特点
1.3.2 DREB转录因子的表达调控
1.3.3 DREB基因在植物抗逆基因工程中的作用
1.4 实时荧光定量PCR的应用
1.5 白花泡桐概述
2 引言
3 材料与方法
3.1 实验材料
3.1.1 植物材料
3.1.2 实验主要试剂和试剂盒
3.1.3 实验主要仪器
3.1.4 常用溶液配方
3.2 实验方法
3.2.1 植物材料培养及胁迫处理
3.2.1.1 材料的培养和实验取样
3.2.1.2 幼苗的胁迫处理
3.2.2 白花泡桐DNA的提取(CTAB法)和检测
3.2.2.1 白花泡桐DNA的提取
3.2.2.2 白花泡桐DNA的检测
3.2.3 白花泡桐RNA的提取和检测
3.2.3.1 白花泡桐RNA的提取
3.2.3.2 白花泡桐RNA的检测
3.2.4 第一链cDNA的合成
3.2.5 泡桐DREB基因保守序列的获得
3.2.5.1 设计合成引物
3.2.5.2 PCR扩增
3.2.6 利用3'RACE、5'RACE克隆已知保守序列的3'端、5'端序列
3.2.6.1 巢式PCR扩增3'端序列
3.2.6.2 巢式PCR扩增5'端序列
3.2.7 白花泡桐DREB基因全长序列的获得
3.2.8 不同胁迫处理下白花泡桐DREB基因的表达分析
3.2.8.1 实时荧光定量PCR相关引物设计
3.2.8.2 引物的特异性检测
3.2.8.3 检测引物二聚体
3.2.8.4 绘制梯度稀释标准曲线DNA模板的制备
3.2.8.5 不同逆境条件下目的基因表达的实时荧光定量分析
4 结果与分析
4.1 白花泡桐DREB基因序列的获得
4.1.1 白花泡桐基因组DNA、RNA检测
4.1.2 白花泡桐DREB保守序列的获得
4.1.3 DREB基因3,端、5,端序列的获得
4.1.4 DREB基因全长序列
4.2 白花泡桐DREB基因生物信息学分析
4.3 不同胁迫处理下白花泡桐DREB基因的表达分析
4.3.1 引物的特异性检测
4.3.2 引物二聚体检测
4.3.3 不同胁迫下目的基因表达的实时荧光定量分析结果
5 结论与讨论
5.1 白花泡桐DREB基因的克隆
5.2 白花泡桐DREB基因全长序列的分析
5.3 白花泡桐DREB基因的不同胁迫条件下表达分析
参考文献
ABSTRACT
本文编号：3634200
【文章来源】：河南农业大学河南省
【文章页数】：50 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
致谢
摘要
英汉缩略词对照
1 文献综述
1.1 植物抗逆分子机制
1.1.1 在逆境胁迫中直接发挥功能的蛋白
1.1.1.1 LEA蛋白
1.1.1.2 水通道蛋白
1.1.1.3 Na~+/H~+逆向转运蛋白
1.1.2 渗透调节因子
1.1.2.1 脯氨酸
1.1.2.2 甜菜碱
1.1.3 抗氧化防御相关酶
1.1.3.1 POD
1.1.3.2 SOD
1.1.4 感应传导胁迫信号、调控基因表达相关基因
1.2 植物抗逆相关转录因子
1.2.1 bZIP转录因子
1.2.2 MYB转录因子
1.2.3 WRKY转录因子
1.2.4 AP2/EREBP转录因子
1.3 DREB转录因子
1.3.1 DREB转录因子的结构特点
1.3.2 DREB转录因子的表达调控
1.3.3 DREB基因在植物抗逆基因工程中的作用
1.4 实时荧光定量PCR的应用
1.5 白花泡桐概述
2 引言
3 材料与方法
3.1 实验材料
3.1.1 植物材料
3.1.2 实验主要试剂和试剂盒
3.1.3 实验主要仪器
3.1.4 常用溶液配方
3.2 实验方法
3.2.1 植物材料培养及胁迫处理
3.2.1.1 材料的培养和实验取样
3.2.1.2 幼苗的胁迫处理
3.2.2 白花泡桐DNA的提取(CTAB法)和检测
3.2.2.1 白花泡桐DNA的提取
3.2.2.2 白花泡桐DNA的检测
3.2.3 白花泡桐RNA的提取和检测
3.2.3.1 白花泡桐RNA的提取
3.2.3.2 白花泡桐RNA的检测
3.2.4 第一链cDNA的合成
3.2.5 泡桐DREB基因保守序列的获得
3.2.5.1 设计合成引物
3.2.5.2 PCR扩增
3.2.6 利用3'RACE、5'RACE克隆已知保守序列的3'端、5'端序列
3.2.6.1 巢式PCR扩增3'端序列
3.2.6.2 巢式PCR扩增5'端序列
3.2.7 白花泡桐DREB基因全长序列的获得
3.2.8 不同胁迫处理下白花泡桐DREB基因的表达分析
3.2.8.1 实时荧光定量PCR相关引物设计
3.2.8.2 引物的特异性检测
3.2.8.3 检测引物二聚体
3.2.8.4 绘制梯度稀释标准曲线DNA模板的制备
3.2.8.5 不同逆境条件下目的基因表达的实时荧光定量分析
4 结果与分析
4.1 白花泡桐DREB基因序列的获得
4.1.1 白花泡桐基因组DNA、RNA检测
4.1.2 白花泡桐DREB保守序列的获得
4.1.3 DREB基因3,端、5,端序列的获得
4.1.4 DREB基因全长序列
4.2 白花泡桐DREB基因生物信息学分析
4.3 不同胁迫处理下白花泡桐DREB基因的表达分析
4.3.1 引物的特异性检测
4.3.2 引物二聚体检测
4.3.3 不同胁迫下目的基因表达的实时荧光定量分析结果
5 结论与讨论
5.1 白花泡桐DREB基因的克隆
5.2 白花泡桐DREB基因全长序列的分析
5.3 白花泡桐DREB基因的不同胁迫条件下表达分析
参考文献
ABSTRACT
本文编号：3634200
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/lylw/3634200.html
