白桦BpEIN3基因功能的研究

发布时间：2022-12-09 02:11

　　EIN3是乙烯信号转导途径上一个重要的转录因子,该基因的表达能够启动一系列调节乙烯的目标基因的表达,对乙烯反应起正调控作用,同时还可以通过乙烯信号与其他信号的交叉反应影响植物多种生理生化过程。为了揭示白桦转BpEIN3基因功能,本实验研究以白桦（Betula platyphylla）为遗传转化受体,进行白桦BpEIN3基因的表达特性分析,同时构建BpEIN3过表达、抑制表达载体并转化白桦,获得BpEIN3转基因株系,阐述该基因的功能,为后续揭示BpEIN3基因调控白桦叶片衰老及细胞程序化死亡分子机理提供参考。研究结果如下:BpEIN3基因表达特性研究表明,用先前已获得的PromEIN3::CUS白桦株系为材料,PCR检测结果为阳性;对获得的转PromEIN3::GUS株系进行ET、IAA、MeJA、SA、GA激素进行不同时间处理,以处理后的转基因株系为材料,进行GUS表达量分析及其活性的测定,结果表明,在不同激素处理下,转PromEIN3::GUS白桦株系GUS的表达量及活性均有不同程度的上升,说明BpEIN3基因对不同的激素均有响应,且响应效果不一致。实验采用农杆菌介导法开展转BpE... 

【文章页数】：67 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
1 绪论
    1.1 EIN3基因功能及研究进展
        1.1.1 EIN3是乙烯信号转导途径上重要的转录因子
        1.1.2 EIN3是乙烯与其他激素交叉对话的重要节点
    1.2 植物类病斑的产生及特征
        1.2.1 植物叶片类病斑产生因素
        1.2.2 植物类病斑突变体的激素信号途径
    1.3 植物叶片衰老的产生及特征
        1.3.1 影响植物叶片衰老的外部因素
        1.3.2 影响植物叶片衰老的内部因素
    1.4 研究的目的意义
    1.5 技术路线
2 BpEIN3基因表达特性分析
    2.1 实验材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 实验试剂
    2.2 实验方法
        2.2.1 Prom_(EIN3)::GUS白桦的PCR检测
        2.2.2 转Prom_(EIN3)::GUS白桦的激素处理
    2.3 结果与分析
        2.3.1 转Prom_(EIN3)::GUS白桦的获得
        2.3.2 Bp_(EIN3)基因对激素的应答特性
    2.4 本章小节
3 白桦BpEIN3基因的遗传转化
    3.1 实验材料
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 载体与菌株
        3.1.3 酶及试剂
    3.2 实验方法
        3.2.1 BpEIN3基因的获得及生物信息学分析
        3.2.2 BpEIN3基因的克隆及超表达载体构建
        3.2.3 农杆菌介导白桦合子胚遗传转化
        3.2.4 转基因植株的分子检测
    3.3 结果与分析
        3.3.1 BpEIN3基因的生物信息学分析
        3.3.2 35::BpEIN3表达载体的获得
        3.3.3 转基因白桦的获得
        3.3.4 转基因植株的分子检测
    3.4 本章小结
4 白桦BpEIN3抑制表达株系出现类病斑早衰
    4.1 实验材料
        4.1.1 植物材料
        4.1.2 实验试剂
        4.1.3 实验仪器
    4.2 实验方法
        4.2.1 抑制表达株系叶片类病斑观察
        4.2.2 抑制表达株系光合、叶绿素荧光参数测定及生长调查
        4.2.3 组织化学法检测抑制表达株系叶片中的H_2O_2和O_2
        4.2.4 抑制表达株系叶片中SOD、POD、CAT酶活测定
        4.2.5 抑制表达株系叶片ABA、JA、SA含量的测定
        4.2.6 抑制表达株系叶片抗叶枯病检测
        4.2.7 抑制表达株系相关基因的qRT-PCR分析
    4.3 数据处理
    4.4 结果与分析
        4.4.1 BpEIN3抑制表达白桦叶片类病斑的出现
        4.4.2 BpEIN3抑制表达株系生长及光合参数比较
        4.4.3 BpEIN3抑制表达株系叶片中H_2O_2及O_(2-)的积累
        4.4.4 BpEIN3抑制表达株系叶片中主要抗氧化酶含量比较
        4.4.5 BpEIN3抑制表达株系叶片主要内源激素的测定
        4.4.6 BpEIN3抑制表达株系抗叶枯病能力的提高
        4.4.7 BpEIN3抑制表达株系叶片不同发育时期相关基因表达特性分析
    4.5 本章小结
5 结论与讨论
    5.1 结论
    5.2 讨论
        5.2.1 BpEIN3基因表达特性分析
        5.2.2 植物类病斑引发叶片早衰
        5.2.3 植物叶片早衰伴随叶片激素含量改变及上调衰老相关基因
        5.2.4 EIN3参与调控叶片早衰形成类病斑
参考文献
攻读学位期间发表的学术论文
致谢


【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3714604