NO介导白桦三萜合成的蛋白质巯基亚硝基化初步研究
发布时间：2023-01-12 11:01
NO是介导植物细胞次生代谢物合成的一种必需信号分子,蛋白质巯基亚硝基化是NO介导的蛋白翻译后修饰之一,也是NO发挥其信号转导作用的重要途径。NO介导的蛋白巯基亚硝基化是否参与了白桦三萜的积累还未见报道。为此,本研究一方面以白桦悬浮细胞为材料,研究NO与H2S互作对白桦三萜积累的影响;另一方面,通过白桦GSNOR基因沉默转基因植株的转录组分析进一步揭示NO介导的蛋白质巯基亚硝基化对白桦三萜代谢的影响。主要结果如下:1.内源NO/H2S介导H2S/NO促进三萜积累的研究将H2S供体NaHS及其抑制剂羟胺（NH2OH）、NO供体硝普钠（SNP）及一氧化氮合酶抑制剂（L-NAME）分别添加到培养8d的白桦悬浮培养体系中处理2d,分析H2S含量,H2S合成关键酶活性,NO含量,NO合成关键酶活性及白桦酯醇含量的变化。研究发现,外源H2S促进内源NO与白桦酯醇的积累,其中NO含量比对照增加了60.84%,白桦酯醇含量比对照增加了 71.03%;外源NO同样促进了内源H2S与白桦酯醇的积累,H2S含量比对照增加了 28.23%,白桦酯醇含量比对照增加了 234.41%;SNP与NH2OH处理相比于S...
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 绪论
1.1 白桦三萜的研究进展
1.2 硫化氢(H2S)的研究进展
1.3 NO与蛋白质翻译后修饰的研究进展
1.3.1 NO的研究进展
1.3.2 NO参与蛋白质亚硝基化的研究进展
1.4 亚硝基化谷胱甘肽还原酶(GSNOR)在植物中的研究进展
1.5 转录组测序研究进展
1.6 本研究的目的及意义
2 材料与方法
2.1 材料的获得与培养
2.1.1 白桦组培苗及白桦悬浮细胞的获得与培养
2.1.2 GSNOR转基因植株的来源
2.2 外源物质的添加
2.3 H_2S含量的测定
2.4 半胱氨酸脱巯基酶活性的测定
2.5 NO含量的测定
2.6 NOS酶活性的测定
2.7 NR酶活性的测定
2.7.1 标准曲线的制作
2.7.2 NR酶活性的测定
2.8 白桦酯醇的提取与测定
2.8.1 标准曲线的制作
2.8.2 测试样品的制备
2.9 转录组测序
2.9.1 植物材料
2.9.2 转录组测序流程
2.9.3 转录组数据分析流程
2.10 实时荧光定量PCR检测
2.10.1 总RNA的提取
2.10.2 实时荧光定量PCR检测
3 结果与分析
3.1 内源NO/H_2S介导H_2S/NO促进三萜积累的研究
3.1.1 外源H_2S对白桦悬浮细胞干重与三萜累积的影响
3.1.2 外源H_2S对白桦悬浮细胞中内源H_2S与NO含量的影响
3.1.3 内源NO/H_2S介导H_2S/NO对白桦酯醇积累的影响
3.1.4 讨论
3.2 白桦GSNOR转基因植株差异表达基因分析
3.2.1 转录组数据的质量监控
3.2.2 白桦Unigene基本注释
3.2.3 差异表达基因概况
3.2.4 讨论
3.3 GSNOR与Unigene相关性分析
3.3.1 GSNOR与Unigene相关性分析
3.3.2 GSNOR与三萜合成相关性分析
3.3.3 差异表达基因的相关性分析
3.3.4 白桦转录因子家族分析
3.3.5 讨论
3.4 差异表达基因分析
3.4.1 差异倍数大于10的Unigene分析
3.4.2 谷胱甘肽代谢相关基因的差异表达
3.4.3 硫代谢相关基因的差异表达
3.4.4 氮代谢相关基因的差异表达
3.4.5 差异表达基因的验证
3.4.6 讨论
结论
参考文献
攻读学位期间发表的学术论文
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]气体信号分子H2S和NO对冷胁迫下大白菜幼苗光合作用的影响[J]. 裴雁曦,贺烽,解梦洁,邵琦,金竹萍. 山西大学学报(自然科学版). 2017(03)
[2]硫化氢对1型糖尿病大鼠肾诱导型一氧化氮合酶的影响[J]. 杨锐,贾强,马善峰,崔淑俊,刘小粉,王元元,高琴. 中南大学学报(医学版). 2017(04)
[3]SNP与K+、Ca2+互作促进白桦悬浮细胞中白桦酯醇累积的初步研究[J]. 黄雅婷,詹亚光,马明媚,范桂枝. 林业科学研究. 2016(06)
[4]亚硝基化在植物细胞死亡及防御反应中的作用[J]. 刘振,刘霞,刘建中. 植物学报. 2016(01)
[5]高温胁迫诱导对白桦悬浮细胞三萜积累及防御酶活性的影响[J]. 常志凯,白祎杰,董恒,尹静,詹亚光. 生物技术通报. 2015(09)
[6]腐胺对白桦悬浮细胞蔗糖代谢和三萜积累影响的初步研究[J]. 刘英甜,周文洋,孙菲菲,王京京,詹亚光,范桂枝. 中草药. 2014(17)
[7]盐胁迫下两个甜瓜品种转录因子的转录组分析[J]. 陈嘉贝,张芙蓉,黄丹枫,张利达,张屹东. 植物生理学报. 2014(02)
[8]植物萜类次生代谢及其调控[J]. 王凌健,方欣,杨长青,李建戌,陈晓亚. 中国科学:生命科学. 2013(12)
[9]光质、光周期对白桦愈伤组织生长和三萜质量分数的影响[J]. 范桂枝,詹亚光,王博,叶玉婷. 东北林业大学学报. 2009(01)
[10]白桦酯醇的研究进展[J]. 范桂枝,詹亚光. 中草药. 2008(10)
硕士论文
[1]CO和H2S调控碳、硫代谢促进三萜积累的初步研究[D]. 孙菲菲.东北林业大学 2016
[2]H2S诱导白桦悬浮细胞中次生代谢物累积的激素生理机制的初步研究[D]. 周文洋.东北林业大学 2015
[3]番茄硫化氢合成酶基因OASTL/LCD的克隆及硫化氢介导一氧化氮诱导番茄幼苗侧根发育研究[D]. 李艳军.南京农业大学 2014
[4]硫化氢诱导桑黄菌丝体中白桦酯醇合成机制的初步研究[D]. 孙美玲.东北林业大学 2014
[5]番茄S-亚硝基谷胱甘肽还原酶基因（SlGSNOR）沉默对番茄高温抗性的影响[D]. 张扬.浙江大学 2013
[6]硫化氢提高紫花苜蓿种子萌发过程中的耐盐性及其与一氧化氮的关系[D]. 王燕琴.南京农业大学 2011
本文编号：3729833
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【学位级别】：硕士
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摘要
Abstract
1 绪论
1.1 白桦三萜的研究进展
1.2 硫化氢(H2S)的研究进展
1.3 NO与蛋白质翻译后修饰的研究进展
1.3.1 NO的研究进展
1.3.2 NO参与蛋白质亚硝基化的研究进展
1.4 亚硝基化谷胱甘肽还原酶(GSNOR)在植物中的研究进展
1.5 转录组测序研究进展
1.6 本研究的目的及意义
2 材料与方法
2.1 材料的获得与培养
2.1.1 白桦组培苗及白桦悬浮细胞的获得与培养
2.1.2 GSNOR转基因植株的来源
2.2 外源物质的添加
2.3 H_2S含量的测定
2.4 半胱氨酸脱巯基酶活性的测定
2.5 NO含量的测定
2.6 NOS酶活性的测定
2.7 NR酶活性的测定
2.7.1 标准曲线的制作
2.7.2 NR酶活性的测定
2.8 白桦酯醇的提取与测定
2.8.1 标准曲线的制作
2.8.2 测试样品的制备
2.9 转录组测序
2.9.1 植物材料
2.9.2 转录组测序流程
2.9.3 转录组数据分析流程
2.10 实时荧光定量PCR检测
2.10.1 总RNA的提取
2.10.2 实时荧光定量PCR检测
3 结果与分析
3.1 内源NO/H_2S介导H_2S/NO促进三萜积累的研究
3.1.1 外源H_2S对白桦悬浮细胞干重与三萜累积的影响
3.1.2 外源H_2S对白桦悬浮细胞中内源H_2S与NO含量的影响
3.1.3 内源NO/H_2S介导H_2S/NO对白桦酯醇积累的影响
3.1.4 讨论
3.2 白桦GSNOR转基因植株差异表达基因分析
3.2.1 转录组数据的质量监控
3.2.2 白桦Unigene基本注释
3.2.3 差异表达基因概况
3.2.4 讨论
3.3 GSNOR与Unigene相关性分析
3.3.1 GSNOR与Unigene相关性分析
3.3.2 GSNOR与三萜合成相关性分析
3.3.3 差异表达基因的相关性分析
3.3.4 白桦转录因子家族分析
3.3.5 讨论
3.4 差异表达基因分析
3.4.1 差异倍数大于10的Unigene分析
3.4.2 谷胱甘肽代谢相关基因的差异表达
3.4.3 硫代谢相关基因的差异表达
3.4.4 氮代谢相关基因的差异表达
3.4.5 差异表达基因的验证
3.4.6 讨论
结论
参考文献
攻读学位期间发表的学术论文
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]气体信号分子H2S和NO对冷胁迫下大白菜幼苗光合作用的影响[J]. 裴雁曦,贺烽,解梦洁,邵琦,金竹萍. 山西大学学报(自然科学版). 2017(03)
[2]硫化氢对1型糖尿病大鼠肾诱导型一氧化氮合酶的影响[J]. 杨锐,贾强,马善峰,崔淑俊,刘小粉,王元元,高琴. 中南大学学报(医学版). 2017(04)
[3]SNP与K+、Ca2+互作促进白桦悬浮细胞中白桦酯醇累积的初步研究[J]. 黄雅婷,詹亚光,马明媚,范桂枝. 林业科学研究. 2016(06)
[4]亚硝基化在植物细胞死亡及防御反应中的作用[J]. 刘振,刘霞,刘建中. 植物学报. 2016(01)
[5]高温胁迫诱导对白桦悬浮细胞三萜积累及防御酶活性的影响[J]. 常志凯,白祎杰,董恒,尹静,詹亚光. 生物技术通报. 2015(09)
[6]腐胺对白桦悬浮细胞蔗糖代谢和三萜积累影响的初步研究[J]. 刘英甜,周文洋,孙菲菲,王京京,詹亚光,范桂枝. 中草药. 2014(17)
[7]盐胁迫下两个甜瓜品种转录因子的转录组分析[J]. 陈嘉贝,张芙蓉,黄丹枫,张利达,张屹东. 植物生理学报. 2014(02)
[8]植物萜类次生代谢及其调控[J]. 王凌健,方欣,杨长青,李建戌,陈晓亚. 中国科学:生命科学. 2013(12)
[9]光质、光周期对白桦愈伤组织生长和三萜质量分数的影响[J]. 范桂枝,詹亚光,王博,叶玉婷. 东北林业大学学报. 2009(01)
[10]白桦酯醇的研究进展[J]. 范桂枝,詹亚光. 中草药. 2008(10)
硕士论文
[1]CO和H2S调控碳、硫代谢促进三萜积累的初步研究[D]. 孙菲菲.东北林业大学 2016
[2]H2S诱导白桦悬浮细胞中次生代谢物累积的激素生理机制的初步研究[D]. 周文洋.东北林业大学 2015
[3]番茄硫化氢合成酶基因OASTL/LCD的克隆及硫化氢介导一氧化氮诱导番茄幼苗侧根发育研究[D]. 李艳军.南京农业大学 2014
[4]硫化氢诱导桑黄菌丝体中白桦酯醇合成机制的初步研究[D]. 孙美玲.东北林业大学 2014
[5]番茄S-亚硝基谷胱甘肽还原酶基因（SlGSNOR）沉默对番茄高温抗性的影响[D]. 张扬.浙江大学 2013
[6]硫化氢提高紫花苜蓿种子萌发过程中的耐盐性及其与一氧化氮的关系[D]. 王燕琴.南京农业大学 2011
本文编号：3729833
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