珙桐DiMYB1基因的克

发布时间：2023-04-10 03:14

　　珙桐(Davidia involucrata Baill.)为珙桐科珙桐属落叶乔木,第三纪古热带植物孑遗种,我国特有的珍稀植物,国家I级重点保护濒危物种,具有极高的观赏价值和学术研究价值。本研究从珙桐果实及种子转录组数据库中筛选到一个编码调控原花青素生物合成的MYB转录因子的基因DiMYB1,对其进行了克隆及功能分析。主要研究结果如下:1.珙桐DiMYB1基因的克隆及生物信息学分析。根据珙桐果实及种子转录组数据库中该基因的ORF序列设计特异引物,以珙桐败育种子的cDNA为模板进行RCR扩增得到全长序列,并在GenBank上登录,登录号为KR996175。利用在线软件对该基因序列进行了生物信息学分析。2.DiYB1基因的表达模式。①DiMYB1基因在珙桐芽、叶片、苞片、果肉、种子中的表达量qPCR分析。结果表明,DiMYB1基因在紫色幼叶中的表达量最高,其次是雄蕊,在芽、茎、成熟叶片、苞片、果肉和种子中微量表达。②DiMYB1基因在正常和败育种子中的表达模式。qPCR分析结果表明,D/MYB1基因在败育种子中的表达量显著高于正常种子,且在中期败育种子中的表达量达到最高。③DiMYB/基因...

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【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
1. 绪论
    1.1 珙桐简介
    1.2 选题背景及课题的研究意义
    1.3 MYB转录因子概述
    1.4 原花青素简介
    1.5 MYB转录因子研究进展
    1.6 技术路线
2. 珙桐DiMYB1基因的克隆及生物信息学分析
    2.1 材料
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 工具酶及试剂
        2.1.3 菌株及载体
        2.1.4 实验设备
    2.2 方法
        2.2.1 珙桐种子总RNA的提取
        2.2.2 克隆引物设计
        2.2.3 PCR扩增产物回收
        2.2.4 A-T克隆
        2.2.5 阳性筛选及鉴定
        2.2.6 基因生物信息学分析
    2.3 结果
        2.3.1 珙桐种子RNA的提取
        2.3.2 珙桐DiMYB1基因的克隆
        2.3.3 珙桐DiMYB1基因的生物信息学分析
    2.4 讨论
3. 珙桐DiMYB1基因的qPCR表达分析
    3.1 珙桐DiMYB1基因在珙桐各组织器官中的表达分析
        3.1.1 材料
        3.1.2 方法
        3.1.3 结果
        3.1.4 讨论
    3.2 珙桐DiMYB1基因在珙桐不同颜色叶片中的表达量及相关性分析
        3.2.1 材料
        3.2.2 方法
        3.2.3 结果
        3.2.4 讨论
4. 珙桐DiMYB1基因的原核表达
    4.1 材料
        4.1.1 载体和菌株
        4.1.2 实验溶液及仪器
    4.2 方法
        4.2.1 pET-28a (+)-DiMYB1表达载体构建
        4.2.2 融合蛋白的表达
        4.2.3 pET-28a (+)-DiMYB 1重组蛋白的纯化
    4.3 结果
        4.3.1 原核表达载体的构建及重组子的鉴定
        4.3.2 珙桐pET28a(+)-DiMYB 1融合蛋白的原核表达及SDS-PAGE检测
        4.3.3 表达产物的纯化
    4.4 讨论
5. DiMYB1基因功能的初步验证
    5.1 材料
        5.1.1 植物材料、载体和菌株
        5.1.2 酶和试剂
        5.1.3 溶液配制
        5.1.4 主要仪器设备
        5.1.5 引物设计
    5.2 方法
        5.2.0 目的基因片段的制备
        5.2.1 pBI-121表达载体的制备
        5.2.2 构建植物表达载体pBI-121-DiMYB1
        5.2.3 土壤农杆菌GV3101感受态的制备及转化
        5.2.4 拟南芥的遗传转化
        5.2.5 转基因拟南芥的筛选、鉴定及表型观察
    5.3 结果
        5.3.1 植物超表达载体的鉴定
        5.3.2 PCR鉴定农杆菌菌液
        5.3.3 转珙桐DiMYB1基因的拟南芥筛选及PCR检测
    5.4 讨论
6. 总结、创新点与展望
    6.1 总结
    6.2 创新点
    6.3 研究展望
参考文献
附录A 常用溶液配制
附录B 攻读硕士学位期间的主要学术成果
致谢



本文编号：3788226