攀枝花苏铁菌根体系构建及营养关系研究
发布时间：2023-04-29 21:17
苏铁(Cycas revoluta Thunb.)俗称铁树,是苏铁科(Cycadaceae)、苏铁属(Cycas)的一种优美的观赏树种。攀枝花苏铁(Cycas panzhihuaensis L.Zhou et S.Y.Yang),是苏铁科(Cycadaceae)、苏铁属(Cycas)的一种植物,为国家一级保护植物,是我国特有树种。因其四季常绿,优美的外形,被大量用于城市绿化建设中,备受人们青睐。然而,由于攀枝花苏铁自然授粉率、结实率和种子的可育率较低等问题,给攀枝花苏铁的保育工作带来了巨大困难。分析原因主要与苏铁菌根密切相关,菌根能给植物提供生长发育所必需的营养元素,因此,研究攀枝花苏铁菌根体系的构建和营养关系,既能为苏铁的快速繁育和生长提供更好的条件,又能为建立人工种植技术和再引入恢复种群技术提供理论指导,具有重要的实践意义。本研究以攀枝花苏铁为研究材料,将前期野外采集的苏铁珊瑚状根,分离筛选出内生放线菌优势菌株,接种到无菌的攀枝花苏铁根部,经共生培养建立共生体系后,利用石蜡切片法观察攀枝花苏铁珊瑚状根的显微结构及重分离培养法证明植物-微生物两者共生体系的形成;用免培养方法构建16S...
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
1 前言
1.1 苏铁保育的研究现状和前景
1.2 苏铁形态解剖学研究
1.3 苏铁与内生放线菌研究
1.3.1 植物的内生菌及其作用研究
1.3.2 植物内生菌天然产物的获取及应用研究
1.3.3 植物内生放线菌研究
1.3.4 植物内生放线菌多样性及分离方法研究
1.3.5 植物内生放线菌宿主多样性研究
1.4 植物内生放线菌的作用研究
1.4.1 内生放线菌对宿主植物的作用研究
1.4.2 内生放线菌对苏铁的影响
1.4.3 内生放线菌的应用前景
1.4.3.1 在农业生产上的应用前景
1.4.3.2 在医药新药开发上的应用
1.5 攀枝花苏铁根的营养关系研究
1.5.1 攀枝花苏铁根的养分含量研究
1.5.2 采用同位素示踪法对微生物和植物之间的营养关系研究
1.6 研究思路及内容
1.6.1 研究思路
1.6.2 研究内容
1.7 研究目的
2 构建攀枝花苏铁与放线菌优势菌株的共生系统
2.1 材料与方法
2.1.1 实验材料
2.1.2 接种优势菌株
2.1.3 接种方案
2.1.4 接种效应检测
2.2 结果与分析
2.3 讨论
2.3.1 沙培和土培结瘤结果的比较
2.3.2 攀枝花苏铁的接种方法
3 攀枝花苏铁珊瑚状根形态解剖学结构研究
3.1 材料与方法
3.1.1 实验材料
3.1.2 攀枝花苏铁珊瑚状根显微结构观察
3.2 结果与分析
3.2.1 攀枝花苏铁珊瑚状根形态解剖学结构观察结果
3.3 讨论
3.3.1 攀枝花苏铁珊瑚状根的形成
4 利用纯培养法对攀枝花苏铁珊瑚状根内生放线菌重分离
4.1 材料与方法
4.1.1 实验材料
4.1.2 攀枝花苏铁珊瑚状根的清洗
4.1.3 攀枝花苏铁珊瑚状根表面灭菌处理
4.1.3.1 表面灭菌处理前的准备操作
4.1.3.2 表面灭菌操作
4.1.4 表面灭菌效应检测
4.1.5 培养基的选择与成分
4.1.6 攀枝花苏铁珊瑚状根内生放线菌重分离操作
4.1.7 攀枝花苏铁内生放线菌的初步划线分离
4.1.8 重分离攀枝花苏铁珊瑚状根内生放线菌的多样性
4.1.8.1 内生放线菌DNA的提取
4.1.8.2 放线菌的PCR扩增
4.2 结果与分析
4.2.1 植物表面灭菌效果
4.2.2 三种培养基重分离效果
4.2.3 鉴定重分离的菌株
4.2.3.1 不同时期的攀枝花苏铁珊瑚状根内生放线菌多样性比较
4.2.3.2 对重分离的优势菌株分析
4.3 讨论
4.3.1 内生放线菌培养基质的选择
4.3.2 不同时期分离的内生放线菌的多样性
5 利用16SrRNA基因克隆文库构建野生攀枝花苏铁珊瑚状根内生放线菌多样性
5.1 材料与方法
5.1.1 实验材料
5.1.2 攀枝花苏铁珊瑚状根总DNA的提取
5.1.2.1 珊瑚状根原生质体的制备与内生微生物的富集
5.1.2.2 攀枝花苏铁珊瑚状根总DNA的提取
5.1.3 16SrRNA基因克隆文库的构建
5.1.3.1 16SrRNA基因的PCR扩增
5.1.4 攀枝花苏铁珊瑚状根16SrRNA片段的克隆
5.1.4.1 PCR产物纯化回收
5.1.4.2 连接
5.1.4.3 转化与蓝白斑挑选
5.1.4.4 阳性克隆筛选
5.1.4.5 送样测定
5.2 结果与分析
5.2.1 植物表面灭菌处理
5.2.2 攀枝花苏铁珊瑚状根总DNA的提取
5.2.3 16SrRNA基因片段的扩增
5.2.4 阳性克隆的检测结果
5.2.5 珊瑚状根中16SrRNA序列分析
5.3 讨论
5.3.1 免培养法的利弊
5.3.2 纯培养法和免培养法的比较
6 攀枝花苏铁菌根与无菌苗根的养分分析
6.1 材料与方法
6.1.1 实验材料
6.1.2 实验方法
6.2 结果与分析
6.3 讨论
6.3.1 接种放线菌后攀枝花苏铁根部的养分变化
6.3.2 苏铁培养方式展望
7 采用同位素示踪法研究菌根改变攀枝花苏铁氮素的吸收形式
7.1 实验材料与方法
7.1.1 实验材料
7.1.2 15N标记法
7.1.3 植物材料的15N/14N分析与计算
7.2 结果与分析
7.2.1 N原子的转移量与转移方向
7.2.2 放线菌对攀枝花苏铁有机氮和无机氮吸收的影响
7.3 讨论
8 接种内生放线菌对攀枝花苏铁生物量的影响
8.1 实验材料与方法
8.1.1 实验材料
8.1.2 实验设计
8.2 结果与分析
8.2.1 生物量的变化研究
8.2.1.1 植株高度的变化
8.2.1.2 结瘤量的变化
8.3 讨论
8.3.1 生物量的测定
9 结论
9.1 本研究的主要结论
9.2 问题与展望
参考文献
个人简介
导师简介
致谢
本文编号：3805759
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
1 前言
1.1 苏铁保育的研究现状和前景
1.2 苏铁形态解剖学研究
1.3 苏铁与内生放线菌研究
1.3.1 植物的内生菌及其作用研究
1.3.2 植物内生菌天然产物的获取及应用研究
1.3.3 植物内生放线菌研究
1.3.4 植物内生放线菌多样性及分离方法研究
1.3.5 植物内生放线菌宿主多样性研究
1.4 植物内生放线菌的作用研究
1.4.1 内生放线菌对宿主植物的作用研究
1.4.2 内生放线菌对苏铁的影响
1.4.3 内生放线菌的应用前景
1.4.3.1 在农业生产上的应用前景
1.4.3.2 在医药新药开发上的应用
1.5 攀枝花苏铁根的营养关系研究
1.5.1 攀枝花苏铁根的养分含量研究
1.5.2 采用同位素示踪法对微生物和植物之间的营养关系研究
1.6 研究思路及内容
1.6.1 研究思路
1.6.2 研究内容
1.7 研究目的
2 构建攀枝花苏铁与放线菌优势菌株的共生系统
2.1 材料与方法
2.1.1 实验材料
2.1.2 接种优势菌株
2.1.3 接种方案
2.1.4 接种效应检测
2.2 结果与分析
2.3 讨论
2.3.1 沙培和土培结瘤结果的比较
2.3.2 攀枝花苏铁的接种方法
3 攀枝花苏铁珊瑚状根形态解剖学结构研究
3.1 材料与方法
3.1.1 实验材料
3.1.2 攀枝花苏铁珊瑚状根显微结构观察
3.2 结果与分析
3.2.1 攀枝花苏铁珊瑚状根形态解剖学结构观察结果
3.3 讨论
3.3.1 攀枝花苏铁珊瑚状根的形成
4 利用纯培养法对攀枝花苏铁珊瑚状根内生放线菌重分离
4.1 材料与方法
4.1.1 实验材料
4.1.2 攀枝花苏铁珊瑚状根的清洗
4.1.3 攀枝花苏铁珊瑚状根表面灭菌处理
4.1.3.1 表面灭菌处理前的准备操作
4.1.3.2 表面灭菌操作
4.1.4 表面灭菌效应检测
4.1.5 培养基的选择与成分
4.1.6 攀枝花苏铁珊瑚状根内生放线菌重分离操作
4.1.7 攀枝花苏铁内生放线菌的初步划线分离
4.1.8 重分离攀枝花苏铁珊瑚状根内生放线菌的多样性
4.1.8.1 内生放线菌DNA的提取
4.1.8.2 放线菌的PCR扩增
4.2 结果与分析
4.2.1 植物表面灭菌效果
4.2.2 三种培养基重分离效果
4.2.3 鉴定重分离的菌株
4.2.3.1 不同时期的攀枝花苏铁珊瑚状根内生放线菌多样性比较
4.2.3.2 对重分离的优势菌株分析
4.3 讨论
4.3.1 内生放线菌培养基质的选择
4.3.2 不同时期分离的内生放线菌的多样性
5 利用16SrRNA基因克隆文库构建野生攀枝花苏铁珊瑚状根内生放线菌多样性
5.1 材料与方法
5.1.1 实验材料
5.1.2 攀枝花苏铁珊瑚状根总DNA的提取
5.1.2.1 珊瑚状根原生质体的制备与内生微生物的富集
5.1.2.2 攀枝花苏铁珊瑚状根总DNA的提取
5.1.3 16SrRNA基因克隆文库的构建
5.1.3.1 16SrRNA基因的PCR扩增
5.1.4 攀枝花苏铁珊瑚状根16SrRNA片段的克隆
5.1.4.1 PCR产物纯化回收
5.1.4.2 连接
5.1.4.3 转化与蓝白斑挑选
5.1.4.4 阳性克隆筛选
5.1.4.5 送样测定
5.2 结果与分析
5.2.1 植物表面灭菌处理
5.2.2 攀枝花苏铁珊瑚状根总DNA的提取
5.2.3 16SrRNA基因片段的扩增
5.2.4 阳性克隆的检测结果
5.2.5 珊瑚状根中16SrRNA序列分析
5.3 讨论
5.3.1 免培养法的利弊
5.3.2 纯培养法和免培养法的比较
6 攀枝花苏铁菌根与无菌苗根的养分分析
6.1 材料与方法
6.1.1 实验材料
6.1.2 实验方法
6.2 结果与分析
6.3 讨论
6.3.1 接种放线菌后攀枝花苏铁根部的养分变化
6.3.2 苏铁培养方式展望
7 采用同位素示踪法研究菌根改变攀枝花苏铁氮素的吸收形式
7.1 实验材料与方法
7.1.1 实验材料
7.1.2 15N标记法
7.1.3 植物材料的15N/14N分析与计算
7.2 结果与分析
7.2.1 N原子的转移量与转移方向
7.2.2 放线菌对攀枝花苏铁有机氮和无机氮吸收的影响
7.3 讨论
8 接种内生放线菌对攀枝花苏铁生物量的影响
8.1 实验材料与方法
8.1.1 实验材料
8.1.2 实验设计
8.2 结果与分析
8.2.1 生物量的变化研究
8.2.1.1 植株高度的变化
8.2.1.2 结瘤量的变化
8.3 讨论
8.3.1 生物量的测定
9 结论
9.1 本研究的主要结论
9.2 问题与展望
参考文献
个人简介
导师简介
致谢
本文编号：3805759
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